Human ALCAM(Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit
中文名称：人白细胞活化黏附因子(ALCAM)酶联免疫吸附测定试剂盒
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- 反应性： Human
- 检测范围： 31.25-2000 pg/mL
- 灵敏度： 18.75 pg/mL
| 产品应用 | ELISA |
| 检测原理 | 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人ALCAM抗体包被于酶标板上，实验时样品（或标准品）中的人ALCAM会与包被抗体结合。后依次加入生物素化的抗人ALCAM抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，抗人ALCAM抗体与结合在包被抗体上的人ALCAM结合，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450 nm波长处测OD值，ALCAM浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中ALCAM的浓度。 |
| 反应类型 | Sandwich-ELISA |
| 规格 |
96 T
/ 48 T
/ 96 T × 5
|
| 反应时间 | 3 h 30 min |
| 反应性 | Human |
| 检测方法 | 比色法;ELISA;夹心法 |
| 检测范围 | 31.25-2000 pg/mL |
| 灵敏度 | 18.75 pg/mL |
| 样本体积 | 100 μL |
| 样本类型 | 血清、血浆、细胞上清、细胞提取液体、组织匀浆等其他生物体液 |
| 特异性 | 可检测样本中的人ALCAM，且与其它类似物无明显交叉反应 |
| 精密度 | 板内，板间变异系数均<10% |
| 回收率 | 80%-120% |
| 储存条件 | 2-8℃/-20℃ |
| 有效期 | 6个月 |
| 数据处理 |
Q1:为什么有些指标有两个货号的产品去测不同的样本类型呢？
各种样本类型的基质是不一样的，为了降低基质本身的影响并提高常规样本测值的准确性，通常会设定不同体系的ELISA试剂盒，并以不同的货号展示。另外，有些指标在不同样本间浓度差异很大，所以通过不同的产品来满足客户对于操作便捷性的需求。
Q2:组织/细胞样本处理中提到的“反复冻融”过程该如何操作？
组织样本：组织研磨后，将其-80℃放置1小时/液氮放置0.5小时，然后置于30℃水浴锅中轻微振荡使其迅速融化，此操作反复1-2次即可。 细胞样本：按上述冻融的操作反复2-3次。若为膜蛋白可以适当超声一下，但需要控制好超声的温度和频率。 样本中建议提前加入蛋白酶抑制剂。常规推荐：PMSF(Cat.E-EL-SR002)。
Q3:稀释方案
稀释100倍：一步稀释。取5μl样本到495μl标准品&样本稀释液内，做100倍稀释； 稀释1000倍：两步稀释。取5μl样本到95μl标准品&样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μl 20倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍； 稀释100000倍：三步稀释。取5μl样本到195μl标准品&样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μl 40倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μl 2000倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍； 每步稀释时取液量不少于3μl，稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀，避免起泡。
Q4:ELISA试剂盒有哪些规格？
有96T/48T/24T/96T*5的四种规格。其中24T为试用装规格。
Q5:试剂盒能检测什么物种？
目前我们的试剂盒检测的种属主要为人，小鼠和大鼠，小部分指标涉及猴，兔，猪和鸡等特殊种属。对于那些命名中带有特定物种名称的试剂盒（如人）是专门针对此物种的。如果说明书中没有指明物种，该试剂盒即在常规哺乳动物种属内是通用的。如果检测物种特殊，建议先跟技术支持确认样本适用性。
Q6:如何进行超声操作？
使用超声波细胞破碎器超声处理悬浮液来裂解细胞（参考：用Soniprep150超声波发生器以振幅14μm超声处理30秒，破碎细胞；或者用超声破碎仪，200W，2秒/次，间隙3秒，总时间3-5分钟或者400A，5秒/次，间隙10秒，反复3-5次）。再于2-8℃，以1500×g离心10分钟，去除细胞碎片，收集上清液。超声过程中注意控制温度。
Q7:ELISA实验时长为多久？
常规竞争法：2.0h左右。 夹心法：常规三步法3.5h左右；QuicKey系列2.5h左右；QuicKey Pro系列1.5h左右。
Q8:试剂盒为什么建议做预实验？如何进行预实验？
预实验的目的是： 1．确定该试剂盒是否适合您的样本检测，以免造成试剂盒和样本的浪费； 2．帮助您熟悉试剂盒的操作流程，尤其是初次使用ELISA试剂盒/更换实验品牌的客户； 3．确定样本稀释与否及稀释倍数是否适合本试剂盒的测定并确认最适样本稀释信息； 4．帮助了解实验过程中可能出现的实验现象或者是问题，好及时作出调整； 具体方法：在正式检测前，选择差异较大的2-3个样本，进行不同浓度的样本稀释，然后按照说明书上的实验操作步骤进行预实验，根据预实验的结果，再结合试剂盒的检测范围来确定样本的最佳稀释倍数。
Q9:ELISA实验是否需要设置复孔？
为了保证实验结果的准确性，建议标准品和样品都做复孔检测。当然，ELISA实验并非要求一定做复孔/3复孔，客户可根据自己的需求设置实验的复孔与否。
Q10:说明书中的标曲可以直接用来样本计算吗？
说明书上的标曲是指示标曲，主要是用于呈现拟合后标曲的形态以及最高/最低OD值的质控范围，不能直接使用。此外，受实验操作、实验环境以及仪器参数设定等因素的影响，实际操作获得的标曲OD值可能会跟说明书不完全一致（整体偏高或偏低），这种情况，建议通过在显色阶段控制前4个蓝色孔有明显颜色梯度，标曲最大OD值在1.2以上，以及标曲的相关系数在0.99以上，作为有效标曲。
实验操作视频
