Human VWF(Von Willebrand Factor) ELISA Kit
中文名称：人血管性血友病因子(VWF)酶联免疫吸附测定试剂盒
Price:
- 反应性： Human
- 检测范围： 1.56-100 ng/mL
- 灵敏度： 0.94 ng/mL
| 产品应用 | ELISA |
| 检测原理 | 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人VWF抗体包被于酶标板上，实验时样品（或标准品）中的人VWF会与包被抗体结合。后依次加入生物素化的抗人VWF抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，抗人VWF抗体与结合在包被抗体上的人VWF结合，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450 nm波长处测OD值，VWF浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中VWF的浓度。 |
| 反应类型 | Sandwich-ELISA |
| 规格 |
96T
/ 48T
/ 96T*5
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| 反应时间 | 3.5h |
| 反应性 | Human |
| 检测方法 | 比色法;ELISA;夹心法 |
| 检测范围 | 1.56-100 ng/mL |
| 灵敏度 | 0.94 ng/mL |
| 样本体积 | 100μL |
| 样本类型 | 血清，血浆，细胞上清，细胞提取液体，组织匀浆等其他生物体液 |
| 特异性 | 可检测样本中的人VWF，且与其它类似物无明显交叉反应 |
| 精密度 | 板内，板间变异系数均<10% |
| 回收率 | 80%-120% |
| 储存条件 | 2-8℃/-20℃ |
| 数据处理 |
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IF: 1.053Journal：Brazilian Journal of Cardiovascular Surgery -
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IF: 1.013
Q1:ELISA试验是否需要技术重复？阳性或阴性对照如何设置？
建议客户做技术重复，一方面确认操作手法，一方面验证和提高实验结果的准确性。 ELISA实验中的阳性对照可以认为就是标准品。阴性对照是与待捡物具有同源性和同质性的空白基质或者已知浓度很低的基质溶液，一般较难获取，如果有可以设置为阴性对照。常规是设定空白对照，即样本稀释液。
Q2:说明书中的标曲可以直接用来样本计算吗？
说明书上的标曲是指示标曲，主要是用于呈现拟合后标曲的形态以及最高/最低OD值的质控范围，不能直接使用。此外，受实验操作、实验环境以及仪器参数设定等因素的影响，实际操作获得的标曲OD值可能会跟说明书不完全一致（整体偏高或偏低），这种情况，建议通过在显色阶段控制前4个蓝色孔有明显颜色梯度，标曲最大OD值在1.2以上，以及标曲的相关系数在0.99以上，作为有效标曲。
Q3:为什么有些指标有两个货号的产品去测不同的样本类型呢？
各种样本类型的基质是不一样的，为了降低基质本身的影响并提高常规样本测值的准确性，通常会设定不同体系的ELISA试剂盒，并以不同的货号展示。另外，有些指标在不同样本间浓度差异很大，所以通过不同的产品来满足客户对于操作便捷性的需求。
Q4:测多个指标但是样本量不够怎么处理？
试剂盒的上样量是不能调整的，但是因为试剂盒灵敏度比较低，很多指标可以稀释检测。建议客户将待检指标和样本量的信息及时提供给技术支持，技术支持会进一步确认样本稀释信息并提供检测方案。
Q5:ELISA试剂盒有哪些规格？
有96T/48T/24T/96T*5的四种规格。其中24T为试用装规格。
Q6:组织/细胞样本处理中提到的“反复冻融”过程该如何操作？
组织样本：组织研磨后，将其-80℃放置1小时/液氮放置0.5小时，然后置于30℃水浴锅中轻微振荡使其迅速融化，此操作反复1-2次即可。 细胞样本：按上述冻融的操作反复2-3次。若为膜蛋白可以适当超声一下，但需要控制好超声的温度和频率。 样本中建议提前加入蛋白酶抑制剂。常规推荐：PMSF(Cat.E-EL-SR002)。
Q7:ELISA实验是否需要设置复孔？
为了保证实验结果的准确性，建议标准品和样品都做复孔检测。当然，ELISA实验并非要求一定做复孔/3复孔，客户可根据自己的需求设置实验的复孔与否。
Q8:如何进行超声操作？
使用超声波细胞破碎器超声处理悬浮液来裂解细胞（参考：用Soniprep150超声波发生器以振幅14μm超声处理30秒，破碎细胞；或者用超声破碎仪，200W，2秒/次，间隙3秒，总时间3-5分钟或者400A，5秒/次，间隙10秒，反复3-5次）。再于2-8℃，以1500×g离心10分钟，去除细胞碎片，收集上清液。超声过程中注意控制温度。
Q9:稀释方案
稀释100倍：一步稀释。取5μl样本到495μl标准品&样本稀释液内，做100倍稀释； 稀释1000倍：两步稀释。取5μl样本到95μl标准品&样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μl 20倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍； 稀释100000倍：三步稀释。取5μl样本到195μl标准品&样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μl 40倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μl 2000倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍； 每步稀释时取液量不少于3μl，稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀，避免起泡。
Q10:试剂盒中铝箔袋、覆膜的用途是什么？
除了已真空封存酶标板的铝箔袋外，试剂盒内会附赠一个空的铝箔袋，客户可以将拆卸的酶标板条密封保存于新铝箔袋内并按照说明书要求存放组分。 覆膜是在孵育阶段用于密封板孔的粘性膜，能控制和减少孵育阶段水分的蒸发并更好地维持整板均匀受热，最大程度降低边缘效应对检测结果的影响。
