Rat ICAM-1/CD54(Intercellular Adhesion Molecule 1) ELISA Kit

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    产品货号:E-EL-R2850c

    中文名:大鼠细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)酶联免疫吸附测定试剂盒

    别称:BB2, P3.58

    规格:
    • 96T
    数量:
    - +
    价格: Inquire

    反应性: Rat

    检测范围: 0.31~20 ng/mL

    灵敏度: 0.19 ng/mL

    货期: 3个工作日+顺丰周期

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    用途

    该试剂盒用于体外定量检测大鼠血清、血浆或其他相关生物液体中天然及部分重组ICAM-1/CD54浓度

    检测原理

    本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗大鼠ICAM-1/CD54抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的大鼠ICAM-1/CD54会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗大鼠ICAM-1/CD54抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗大鼠ICAM-1/CD54抗体与结合在包被抗体上的大鼠ICAM-1/CD54结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,ICAM-1/CD54浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中ICAM-1/CD54的浓度。

    反应类型 夹心法
    规格 96T
    反应时间 4.5h
    反应性 大鼠
    检测方法 Colormetric
    检测范围 0.31—20 ng/mL
    灵敏度 0.19 ng/mL
    样本体积 100μL
    样本类型 血清、血浆或其他相关生物液体

    特异性

    可检测样本中的大鼠ICAM-1/CD54,且与其它相关蛋白无明显交叉反应。

    重复性

    板内,板间变异系数均<10%。

    典型数据

    由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。

    (ng/mL) O.D Average Corrected
    20 2.304
    2.348
    2.326 2.259
    10 1.864
    1.696
    1.78 1.713
    5 1.281
    1.134
    1.208 1.14
    2.5 0.744
    0.722
    0.733 0.666
    1.25 0.499
    0.455
    0.477 0.41
    0.63 0.315
    0.281
    0.298 0.231
    0.31 0.18
    0.169
    0.175 0.107
    0 0.068
    0.067
    0.068 --

    精密度

    板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
    板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。

    Intra-assay Precision Inter-assay Precision
    Sample 1 2 3 1 2 3
    n 20 20 20 20 20 20
    Mean
    (ng/mL)
    2.21 5.80 12.50 2.10 5.80 12.50
    Standard
    deviation
    0.10 0.23 0.62 0.06 0.41 0.75
    C V (%) 4.32 5.30 4.20 3.10 5.34 6.30

    回收率

    分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。

    Sample Type Range (%) Average Recovery (%)
    Serum (n=5) 86-98 92
    EDTA plasma (n=5) 95-109 101
    Cell culture media (n=5) 89-104 96

    线性

    分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。

    Serum (n=5) EDTA plasma (n=5) Cell culture media (n=5)
    1:2 Range (%) 97-112 88-101 92-103
    Average (%) 102 95 98
    1:4 Range (%) 92-105 83-99 84-94
    Average (%) 99 90 89
    1:8 Range (%) 91-103 85-99 84-96
    Average (%) 98 90 89
    1:16 Range (%) 89-100 83-94 82-95
    Average (%) 94 88 89

    试剂盒组成及保存

    未拆封的试剂盒可在4℃保存一周;如果一周以后才使用试剂盒,请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。

    中文名称 英文名称 规格 保存条件
    ELISA酶标板(可拆卸) Micro ELISA Plate(Dismountable) 8 孔×12 条 -20℃,可存放6个月
    冻干标准品 Reference Standard 2 支
    浓缩生物素化抗体(100×) Concentrated Biotinylated Detection Ab 1支 120 μL
    浓缩HRP酶结合物(100×) Concentrated HRP Conjugate 1支 120 μL -20℃(避光),可存放6个月
    标准品&样品稀释液 Reference Standard & Sample Diluent 1瓶 20 mL 4℃.可存放6个月
    生物素化抗体稀释液 Biotinylated Detection Ab Diluent 1瓶 14 mL
    酶结合物稀释液 HRP Conjugate Diluent 1瓶 14 mL
    浓缩洗涤液(25×) Concentrated Wash Buffer (25×) 1瓶 30 mL
    底物溶液(TMB) Substrate Reagent 1瓶 10 mL 4℃(避光)
    反应终止液 Stop Solution 1瓶 10 mL 4℃
    封板覆膜 Plate Sealer 5 张
    产品说明书 Product Description 1 份
    质检报告 Certificate of Analysis 1 份

    说明:所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。
    试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些,请在使用时量取而非直接倒出。

    试验所需自备物品

    • 1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
    • 2. 高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
    • 3. 37℃恒温箱,双蒸水或去离子水
    • 4. 吸水纸

    操作步骤

    1.Add 100 μL standard or sample to each well. Incubate for 90 min at 37℃.

    2.Remove the liquid.

    3.Add 100 μL Biotinylated Detection Ab. Incubate for 1 hour at 37℃. Aspirate and wash 3 times.

    4.Add 100 μL HRP Conjugate. Incubate for 30 min at 37℃. Aspirate and wash 5 times.

    5.Add 90 μL of Substrate Reagent. Incubate for 15 min at 37℃.

    6.Add 50 μL Stop Solution.

    7.Read at 450 nm immediately. Calculation of results.

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