RIPA Lysis Buffer

  • RIPA裂解液-Elabscience
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    产品货号:E-BC-R327

    中文名:RIPA裂解液

    规格:
    • 20 mL
    • 50 mL
    • 100 mL
    数量:
    - +
    价格: ¥100

    应用: WB

    储存: -20°C,6个月

    货期: 现货+顺丰周期

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    产品简介: 

    RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液,作为Western Blot试验中从动物组织或细胞中提取蛋白的首选裂解液。

     

    产品组成:



     

    20 mL

    50 mL

    100 mL

    RIPA裂解液

    20 mL

    50 mL

    100 mL

    PMSF(蛋白酶抑制剂)

    200 μL

    500 μL

    1 mL

    原钒酸钠(磷酸酶抑制剂)

    200 μL

    500 μL

    1 mL

    说明书

    1



    产品使用说明:

    1.组织样本的处理

    a.取待测组织样本,用预冷的PBS(0.01 M,pH=7.4)充分洗涤,洗去组织表面血液及内部杂物。

    b.称重剪碎,加入适量比例的RIPA裂解液混合物(1 mL的RIPA裂解液中加入10 μL PMSF和10 μL原矾酸钠)进行匀浆裂解。建议按组织重量:RIPA体积=3:10的比例匀浆,例如0.3 g的组织样本加入1 mL的RIPA裂解液,具体体积可根据实验需要适当调整。

    c.匀浆后冰上震荡裂解30 min。

    d.在35 – 40%的功率下,超声处理样本1 min(冰浴条件下进行),超声2 s,间隔2 s,确保细胞充分裂解,降低样本粘度。

    e.4 ℃下12,000 rpm离心10 min,取上清,待测定蛋白浓度。


    2.细胞样本处理

    a.收集待测细胞样本,用预冷的PBS(0.01 M,pH=7.4)充分洗涤,洗去培养基等成分(一般建议洗涤3次)。

    b.加入适量比例的RIPA裂解液混合物(1 mL RIPA裂解液中加入10 μL PMSF和10 μL原矾酸钠)进行冰上裂解30 min。建议6孔板中每孔加入0.1 mL RIPA裂解液(细胞中的蛋白含量可能会不同,可适当调整加入裂解液的体积)。

    c.在35 – 40%的功率下,超声处理样本1 min(冰浴条件下进行),超声2 s,间隔2 s,确保细胞充分裂解,降低样本粘度。

    d.4℃下12,000 rpm离心10 min,取上清,待测定蛋白浓度。

     

    RIPA裂解液主要成分:

    50 mM Tris (pH=7.4),150 mM NaCl,1 % TritonX-100,1 %脱氧胆酸钠,1 mM EDTA,0.1 % SDS,10 mM氟化钠,1 mM原钒酸钠,1 mM PMSF。


    保存条件: 

    -20 ℃冻存,保质期6个月。


    注意事项:

    1. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4 ℃ 进行。

    2.  PMSF和原矾酸钠在使用前添加,每1 mL裂解液中加入10 μL PMSF和10 μL原矾酸钠,使终浓度为1 mM。如发现RIPA有沉淀,请放置室温或温水浴进行溶解。

    3. RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。建议通过短暂超声进行处理,离心后取上清进行后续试验。

    4. 用RIPA裂解的得到的蛋白样品,因含有高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定样品的蛋白浓度,建议使用BCA法测定蛋白浓度。

    5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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