铁死亡常见FAQs
Source: Elabscience®Published: 2022-08-04
1. 铁死亡研究一般是检测总铁还是亚铁含量？
铁死亡研究测总铁和亚铁的都有，但更多科研者趋向于检测亚铁含量，因为铁死亡的特征有游离亚铁离子超载和脂质过氧化物累积。
2. 细胞亚铁比色法测试盒，这个试剂盒在细胞亚铁含量计算时，可以通过测蛋白的方式来计算吗？
使用细胞亚铁比色法测试盒时，在细胞样本处理的时候，用到了试剂盒中的试剂一，而试剂一的成分对测蛋白含量是有影响的，所以不能用测蛋白的方式来计算细胞亚铁含量。
3. E-BC-K772-M总铁比色法测试盒，检测组织样本，37℃孵育40 min之后，颜色在沉淀中是怎么回事？
使用E-BC-K772-M检测组织样本时，37℃孵育40 min之后，颜色出现在沉淀中，这个是正常现象，请按照说明书继续离心，取上清液检测就可以。
4. 使用细胞总铁比色法测试盒，贴壁细胞怎么处理？细胞怎么计数？
① 贴壁细胞，建议用细胞刮把细胞刮下来，离心收集细胞沉淀，然后按说明书上的样本处理要求，加入试剂一进行细胞裂解；
② 细胞计数一般通过细胞计数仪进行计数。
② 细胞计数一般通过细胞计数仪进行计数。
5. 细胞亚铁比色法测试盒中配制好的标准品，可以保存多久？
细胞亚铁比色法测试盒中的标准品建议按需配制，现配现用。
6. 测细胞MDA时，在细胞样本处理的时候，细胞匀浆制成悬液后要不要离心处理？
测细胞MDA时，细胞破碎制成悬液后，建议不离心，直接进行检测。
7. 细胞样本MDA检测，要用试剂五提取液处理细胞吗，可以用PBS代替吗？细胞样本用试剂五处理后用于测蛋白会有影响吗？
测细胞MDA时，细胞样本处理需要用试剂盒里的试剂五提取液，不能用PBS代替；试剂五处理后的细胞样本一部分用于蛋白测定，对于测蛋白不会有影响。
8. 测细胞MDA时，细胞样本制成细胞悬液后，暂时不测，最多能放几天？
一般不建议冻存细胞匀浆液，如果暂时不测，可以冻存细胞，把收集好的细胞沉淀放到-80℃冻着，但不建议冻存处理后的细胞悬液。
9. 细胞MDA试剂盒，盒子里的96孔板可以用普通板子代替吗？
可以用实验室里普通的96孔板代替。
10. E-BC-K028-M细胞MDA试剂盒，这个试剂盒可以测动物组织样本吗？
细胞MDA试剂盒测不了动物组织样本，测动物组织样本推荐货号E-BC-K025-M。
11. ROS能否检测血清或组织匀浆样本中的ROS？
不能，目前我们的E-BC-K138-F试剂盒，主要检测的是活细胞中的ROS，因此，该试剂盒只能用于活细胞或新鲜组织（新鲜组织样本制备成单细胞悬液）的检测。
12. 使用ROS试剂盒时，试剂一和试剂二的使用浓度有推荐的吗？ROS试剂盒可以检测多少个样本？
使用ROS试剂盒时，试剂一的具体使用浓度和探针装载时间以及试剂二的具体使用浓度和刺激时间，这些条件都需通过预实验来进行探索，由预实验探索的条件来确定，因为不同的细胞及实验设计，试剂一和试剂二的使用浓度 是会有差异的，不可一概而论。ROS试剂盒可检测样本数取决于试剂一的浓度及用量，一般可测100~500个样本不等。
13. ROS试剂盒测的是什么颜色的荧光，样本本身有荧光对结果有影响吗？
ROS试剂盒测的是强绿色荧光，如果样本自身的荧光也是绿色就会有干扰，若是其他颜色的荧光是没有什么影响的。
14. 请问ROS试剂盒用荧光酶标仪测出的荧光强度值范围是多少呢？
不同的荧光酶标仪，仪器的灵敏度不同，荧光值也会不同，有的差别还挺大的。因此，目前ROS的荧光强度没有确定的范围作为参考。
15. ROS试剂盒，说明书中阳性对照和阴性对照是什么意思？
阳性对照和阴性对照是在正常细胞的基础上设置的；阳性对照需要加试剂一工作液和试剂二工作液，阴性对照试剂一工作液和试剂二工作液都不加。
16. LPO试剂盒，请问这个能否检测细胞样本呢？如果可以检测的话，怎么处理细胞样本？
LPO试剂盒是可以检测细胞样本的。细胞样本的处理：取收集好的细胞按约3*10^6个细胞加入300 μLPBS（0.01 M，pH 7.4），进行超声破碎或机械匀浆，充分破碎（无明显的细胞沉淀，可在显微镜下观察），4℃，1500×g离心 10 min，取上清置于冰上待测。
17. 使用LPO试剂盒时，请问标准曲线是需要每次都做吗？
由于每次实验的条件，及各种影响因素都存在差异，因此，建议每次实验时都需重新制作标准曲线，以便得到更准确、可靠的检测结果。
18. LPO试剂盒，说明书中提到的超声破碎条件，实验室仪器没有相应的功率要怎么设置参数呢？
说明书上提供的超声条件及相关参数只是作为一个参考，若是仪器没有相应的功率，可以按照实验室常规操作进行设置仪器，使样本达到充分破碎的效果即可。
