细胞代谢测定实验常见问答

1 贴壁细胞如何收集？

吸弃培养液，用冷的PBS（0.01 M，pH 7.4）轻轻将细胞洗一遍，然后用胰蛋白酶消化或细胞刮收集细胞，加入2-5 mL PBS（0.01 M，pH 7.4），制成细胞悬液，4°C，1000×g离心5分钟后收集细胞。

2 收集贴壁细胞时，可以用胰酶消化吗？

可以使用胰酶消化细胞，也可以用细胞刮刮下细胞。

3 如何进行细胞计数

细胞计数方法常见的有血球计数板，流式细胞仪或自动化的细胞计数器/仪，可根据实验室的设备选择合适的方法

4 细胞样本暂时不测，如何保存？

细胞样本若暂时不测定，可低温冻存，避免反复冻融。一般-20℃可保存半个月，-80℃可保存1个月。特殊指标对样本有较高要求除外。制备好的细胞匀浆最好当天进行测定。

5 细胞样本匀浆是什么意思？匀浆的方式有哪些？

匀浆是指将细胞，加入特定溶液后，通过某种方式进行充分混匀，均质化。细胞常见的匀浆方式有以下几种：
a. 手工匀浆：收集一定数量的细胞，加入匀浆介质，左手持匀浆管将下端置于冰浴中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（5～8 min），使细胞充分匀浆；或者倒入研钵中，加入液氮进行研磨，充分研磨后，加入匀浆介质，再将制好的匀浆液吸取到EP管中备用。

b. 机械匀浆：将样本装入EP管，加入匀浆介质，用匀浆机，在低温条件下，60 Hz，90 s研磨制成细胞匀浆

c. 超声破碎：用超声波发生器以振幅14 μm超声处理30 s，使细胞破碎；或者用超声细胞破碎仪，200 W，2 s/次，间隙3 s，总时间5 min。

d. 反复冻融：用匀浆介质重悬细胞，再将细胞悬液进行“冷冻-融化-冷冻”循环，具体如下：将其-80℃放置1小时/液氮放置0.5小时，然后置于30℃水浴锅中轻微振荡使其迅速融化，重复3次左右。此法会使某些酶活力受影响，因此检测细胞样本的酶活力时不推荐使用反复冻融来破碎细胞。

6 细胞样本可以使用裂解液处理吗？

由于代谢测定试剂盒的基本原理是基于化学反应，而裂解液中的成分相对比较复杂，可能会有成分对试剂盒的反应产生干扰，所以不建议使用自己的裂解液处理样本。Elabscience^®为了提高客户实验的简便性，开发了针对特定试剂盒适用的裂解液（E-BC-L001、E-BC-L002），可与试剂盒搭配使用。

7 细胞样本检测时，需要对样本进行稀释吗？

一般对于大部分的指标，细胞样本不需要稀释。但考虑到样本差异、造模等因素的影响，建议在正式实验前选2-3个样本进行预实验，以确定是否需要稀释以及合适的稀释倍数。

8 为什么有些指标测定细胞样本时，还需要测定样本的蛋白浓度？

一般测细胞样本时要先进行匀浆处理，匀浆的程度不一样释放的蛋白也不一样，测蛋白就是为了校正匀浆破碎的程度。

9 为什么测定细胞样本时，显色很浅或几乎没有颜色？

可能是细胞样本中该指标的含量比较低，通过肉眼无法观察到明显的颜色，但是通过仪器是可以检测到的。

10 细胞样本测值很低，和空白差异不大，应该如何调整？

可能是细胞中该指标的含量比较低，可以通过增加细胞浓度试试，增加细胞量或者减少匀浆介质的加入量（需超过最低上样量体积），如有疑问可以咨询技术支持。