CCK-8法：细胞增殖和毒性检测的明星方法

我们平时在做每个实验之前，都要搞清楚这个实验到底是什么、为什么这么做，CCK-8的英文全称是Cell Counting Kit-8，也就是进行细胞计数的一个盒子，那它的用途也就大致可以猜到，和细胞增殖相关的实验都可以用这个方法。

CCK-8法如今也可以完美替代传统的MTT法，被誉为细胞增殖和毒性检测的明星方法，今天我们主要来了解一下CCK-8法的原理、用途、以及操作步骤等，希望对大家的实验有所帮助。

CCK-8的原理

在CCK-8试剂盒中，最主要的化学药品是WST-8，其检测原理同WST -1，它在电子载体作用下被细胞线粒体中的脱氢酶氧化还原为高度水溶性的橙黄色甲臜产物。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。

CCK -8 溶液可以直接使用，无需预配各种成分，而且比WST -1 更加稳定，产物更易溶解，故而敏感度高、结果准确、重复性好，目前广泛用于细胞增殖测定或毒性实验，是一种操作简便、无放射性的比色检测法。

CCK-8法的用途

1，细胞增殖测定：细胞增殖实验在很多领域都会用到，比如肿瘤相关、损伤后修复等。

2，药物筛选：在测定一个药物的毒性和安全有效浓度时，经常会用到CCK-8。

3.细胞毒性测定：这个可以和各个处理因素对细胞活性和增殖的影响，比如在UV、低氧或者什么化学物品对细胞的影响上。

4，肿瘤药敏试验：这个是用的比较广的。

5，微生物对细胞的毒性或增殖的实验。

由此可以看出，CCK -8法主要用来检测细胞的增殖和毒性检测，下面也将详细介绍一下相关操作步骤。

CCK-8法的操作步骤

实验一：细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(37℃,5% CO2)。

2、向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

实验二：细胞增殖-毒性检测

1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(37℃，5% CO2)。

2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如：6、12、24或48小时)。

4、向每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

7、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基)，去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

活力计算：

细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100

A(加药)：具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度

A(空白)：具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度

A(0加药)：具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

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