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二抗选择指南

二抗选择指南

2017-09-04作者:admin赞:419

二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体,在免疫学实验中,经常需要针对实验需求选择不同的二抗。通常情况下,某一特定的实验中可能同时有几种二抗可供选择,如何能选择到最适合该实验的二抗,需要综合考虑以下几个方面:


1) 一抗的物种来源

2) 一抗的类别亚型

3) 二抗的偶联标记

4) 抗体的纯化方法



1. 一抗的物种来源

一抗是什么物种来源的,相应的二抗也要是抗该物种的抗体。例如,如果一抗是在小鼠体内制备的,那么就应当选择抗小鼠的二抗,如果一抗是在兔体内制备的,那么二抗就应当是抗兔的抗体。至于二抗本身是在什么动物中制备的对二抗的质量并无明显的影响。

2. 一抗的类别亚型

二抗需与一抗的类别或亚型相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗IgG抗体。
单克隆抗体的类别及亚型通常会在产品列表中列出,如果你的一抗是小鼠IgM,那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM,或是抗小鼠IgG抗体。
如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚型(IgG1IgG2aIgG2bIgG3),那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合,或者你也可以选择专门针对这一亚型的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以选择抗IgG1的二抗,此种抗体在双标记实验中尤其适合。
如果你不知道一抗是哪一类别或亚型,那么抗小鼠IgG是一个不错的选择,因为此种抗体可以识别大多数类型的IgG免疫球蛋白。

3. 二抗的偶联标记

一般来讲,偶联到二抗上的探针主要有HRP、荧光素、生物素等。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。ELISAWestern Blot和免疫组化中,最常用的二抗是酶标二抗(如HRP);而免疫荧光和流式细胞术中通常使用荧光素标记的二抗,如FITCCY3PE等荧光素。如果想要更大程度的放大检测信号,可以使用Biotin/Avidin检测系统。

4. 抗体的纯化方法

亲和层析纯化的抗体一般更受人们欢迎,因为这些产品的特异性较高,产生的非特异性条带和背景较低。但有些情况下也要考虑到纯化过程中IgG的损失,因为含有亲和力很高的抗体,尤其是当目的抗原存在的量很小的时候,高亲和性的IgG部分就显得尤为重要。