• 本公司产品仅供体外研究使用,不用于临床诊断

Caspase 3 Activity Assay Kit (by Spectrophotometry)[311]

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    产品货号:E-CK-A311

    中文名:Caspase 3活性检测试剂盒(分光光度法)

    规格:
    • 20T
    • 50T
    • 100T
    数量:
    - +
    价格: ¥500

    产品简介

    Elabscience®自主研发的Caspase 3活性检测试剂盒采用分光光度法,可用于检测细胞、组织裂解液或纯化的Caspase 3活性。


    检测原理

    Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 3也称CPP32、Yama或apopain,属于Caspase家族的CED-3亚家族(CED-3 subfamily),是细胞凋亡过程中的一个关键酶,也是哺乳动物细胞中研究最多的一个Caspase。Caspase 3可以剪切pro-Caspase 2、6、7和9,并可直接特异性剪切许多Caspase 底物,包括PARP (poly(ADP-ribose) polymerase)、ICAD (Inhibitor of Caspase-activated deoxyribonuclease)、gelsolin和fodrin等。这些由Caspase 3介导的蛋白剪切是细胞凋亡分子机制的重要组成部分。另外,Caspase 3在细胞核凋亡过程中也起到了关键作用,包括染色质固缩(chromatin condensention)、DNA片段化(DNA fragmentation)等。同时Caspase 3对细胞起泡(Cell blebbing)也起到关键作用。Caspase 3在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;在细胞发生凋亡阶段,Caspase 3被激活,活化的Caspase 3由两个大亚基和两个小亚基组成,裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。

    Caspase 3分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase 3序列特异性的多肽(Ac-DEVD-pNA (acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide)偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被Caspase 3剪切后,黄色发光基团pNA游离出来,可通过酶标仪或分光光度计(λ=405 nm 或400 nm)测定其吸光值,通过测定吸光度来检测Caspase 3的活性。


    试剂盒组成


    产品编号

    成分

    20 T

    50 T

    100 T

    Storage

     E-CK-A311A

      裂解液

    3.0 mL

    7.5 mL

    15 mL

    -20°C

     E-CK-A311B

      2 ×反应液

    1.0 mL

    1.25 mL x 2

    5.0 mL

    -20°C

     E-CK-A311C

      Ac-DEVD-pNA

    100 μL

    250 μL

    500 μL

    -20°C

     E-CK-A311D

      DTT

    50 μL

    100 μL

    150 μL

    -20°C

       说明书

    一份



    自备试剂

    PBS(推荐使用Elabscience®E-BC-R187)、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用,推荐使用Elabscience®E-BC-K168-S) 。


    保存条件

    -20°C保存。Ac-DEVD-pNA[E-CK-A311C]应避免反复冻融,请适当分装并避光保存。

     

    注意事项

    1.  保质期1年。为获得最佳的使用效果,请在3~6个月内使用。

    2.  因裂解液中含有还原剂,不适合使用BCA法测定蛋白浓度,测定蛋白浓度时推荐使用Elabscience®生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒[E-BC-K168-S]。

    3.  有文献报道少数类型的细胞凋亡检测不到Caspase 3的激活。可能存在非依赖于Caspase 3活化的机制,这种情况下利用本试剂盒检测Caspase 3活性无明显改变,需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。

    4.  本试剂盒的裂解液可以和Elabscience®生产的其它Caspase活性检测试剂盒的裂解液通用,即本试剂盒裂解液制备的蛋白样品可以用于Elabscience®其它Caspase活性检测试剂盒的检测。

    5.   pNA(4-硝基苯胺)对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。pNA在较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以20-25°C 水浴温育片刻至全部融解后使用。

    6.  样品中激活的Caspase水平较低时,首先确认凋亡现象是否明显。如果凋亡比较明显且确认该Caspase是可以被激活的,可适当调节诱导细胞凋亡的时间,找到一个Caspase激活比较强的时间点,以便检测出该Caspase的激活。可作时间曲线,例如诱导凋亡0、2、4、8、16和24小时,或0、1、2、4、8和16小时,或0、1、2、4、6和8小时等。具体的诱导凋亡时间需根据具体情况而定。

    7.  本产品仅限专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

    8.  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。




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