• 本公司产品仅供体外研究使用,不用于临床诊断

Caspase 9 Activity Assay Kit (by Spectrophotometry)[313]

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    产品货号:E-CK-A313

    中文名:Caspase 9活性检测试剂盒(分光光度法)

    规格:
    • 20T
    • 50T
    • 100T
    数量:
    - +
    价格: ¥500

    产品简介

    Elabscience®自主研发的Caspase 9活性检测试剂盒采用分光光度法,可用于检测细胞、组织裂解液或纯化的Caspase 9活性。


    检测原理

    Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 9也称ICE-LAP6或Mch6,Caspase 9被认为是细胞凋亡信号转导过程中上游的一个Caspase。线粒体释放细胞色素c后,Caspase 9可以和细胞色素c以及Apaf1形成复合物,同时被激活。激活的Caspase 9可以激活细胞凋亡的最关键酶Caspase3,从而促进后续的细胞凋亡信号。Caspase 9的激活可通过磷酸化进行调控。Caspase 9 在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;但在细胞发生凋亡阶段,它被激活,最终导致细胞凋亡。

    Caspase 9分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase 9序列特异性的多肽(Ac-LEHD-pNA (acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide)偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被Caspase 9剪切后,黄色发光基团pNA游离出来,可通过酶标仪或分光光度计(λ=405nm 或400nm)测定其吸光值,通过测定吸光度来检测Caspase 9的活性。


    试剂盒组成

    产品编号

    成分

    20 T

    50 T

    100 T

    Storage

    E-CK-A313A

     裂解液

    3.0 mL

    7.5 mL 

    15 mL

    -20°C

    E-CK-A313B

     2 ×反应液

    1.0 mL

    1.25 mLx 2

    5.0 mL

    -20°C

    E-CK-A313C

     Ac-LEHD-pNA

    100 μL

    250 μL

    500 μL

    -20°C

    E-CK-A313D

     DTT

    50 μL

    100 μL

    150 μL

    -20°C

    说明书

    一份



    自备试剂

    PBS(推荐使用ELabscience®E-BC-R187)、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用,推荐使用ELabscience®E-BC-K168-S)。


     

    保存条件

    -20°C 保存。Ac-LEHD-pNA[E-CK-A313C]避免反复冻融,请注意适当分装和避光保存。

     

    注意事项

    1.  保质期1年。为获得最佳的使用效果,请在3~6个月内使用。

    2.  因裂解液中含有还原剂,不适合使用BCA法测定蛋白浓度,测定蛋白浓度时推荐使用Elabscience®生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒[E-BC-K168-S]

    3.  有文献报道少数类型的细胞凋亡检测不到Caspase 9的激活。可能存在非依赖于Caspase 9活化的机制,这种情况下利用本试剂盒检测Caspase 9活性无明显改变,需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。

    4.  本试剂盒的裂解液可以和Elabscience®生产的其它Caspase活性检测试剂盒的裂解液通用,即本试剂盒裂解液制备的蛋白样品可以用于Elabscience®其它Caspase活性检测试剂盒的检测。

    5.  pNA(4-硝基苯胺)对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。pNA在较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以20-25°C 水浴温育片刻至全部融解后使用。

    6.  样品中激活的Caspase水平较低时,首先确认凋亡现象是否明显。如果凋亡比较明显且确认该Caspase是可以被激活的,可适当调节诱导细胞凋亡的时间,找到一个Caspase激活比较强的时间点,以便检测出该Caspase的激活。可作时间曲线,例如诱导凋亡0、2、4、8、16和24小时,或0、1、2、4、8和16小时,或0、1、2、4、6和8小时等。具体的诱导凋亡时间需根据具体情况而定。

    7.  本产品仅限专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

    8.  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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