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Cytochrome c1 Polyclonal Antibody

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    产品货号:E-AB-40271

    别称:Complex III subunit 4,Complex III subunit IV,CY1,CYC1,Cytochrome b c1 complex subunit 4,Cytochrome b-c1 complex subunit 4,Cytochrome bc1 complex subunit 4,Cytochrome c 1,Cytochrome c-1,Cytochrome c1,heme protein,mitochondrial,Ubiquinol cytochrome c reductase complex cytochrome c1 subunit,Ubiquinol-cytochrome-c reductase complex cytochrome c1 subunit,UQCR4

    规格:
    • 20μL
    • 60μL
    • 120μL
    • 200μL
    数量:
    - +
    价格: ¥400

    宿主: Rabbit

    反应性: H,M,R

    应用: WB,IHC

    货期: 现货+顺丰时间

    加入购物车 比较 咨询 说明书

    Overview

    Synonyms Complex III subunit 4,Complex III subunit IV,CY1,CYC1,Cytochrome b c1 complex subunit 4,Cytochrome b-c1 complex subunit 4,Cytochrome bc1 complex subunit 4,Cytochrome c 1,Cytochrome c-1,Cytochrome c1,heme protein,mitochondrial,Ubiquinol cytochrome c reductase complex cytochrome c1 subunit,Ubiquinol-cytochrome-c reductase complex cytochrome c1 subunit,UQCR4
    Swissprot Q9D0M3
    Source Rabbit
    Reactivity Human,Mouse,Rat
    Immunogen Recombinant Mouse Cytochrome c1, heme protein, mitochondrial protein
    Application WB(Detection kit: E-IR-R304),IHC(Detection kit: E-IR-R217)
    Recommended dilution WB 1:500-1:1000 IHC 1:100-1:200
    Concentration 1mg/mL

    Operation Manual

    Cytochrome c1 Polyclonal Antibody Western Blot

    操作指南(下载PDF

    为了方便操作及WB结果的准确性,现提供了WB配套试剂盒(Cat# E-IR-R304),含有从样本制备到抗体检测用到的试剂。请根据具体需要订购合适的试剂盒。

    实验流程 实验条件
    胶浓度 12%
    转膜 150mA,1.5h
    封闭 5%脱脂奶粉,1.5h
    一抗 1:500
    二抗 1:5000

    更多详细实验条件和操作步骤,请点击.. 详情 ↓

    蛋白样本的制备

    1. 样本的处理

    1)组织样本处理:
    a.取待测组织样本,用预冷的PBS(Cat# E-BC-R187)充分洗涤,洗去组织表面血液及内部杂物。
    b.称重剪碎,加入适量比例的RIPA裂解液混合物(Cat# E-BC-R327)(1mL的RIPA裂解液中加入10μL PMSF和10μL原矾酸钠进行匀浆裂解,均浆后冰上震荡裂解30min。
    建议按组织重量:RIPA体积=3:10的比例匀浆,例如0.3g的组织样本对应1mL的RIPA裂解液,具体体积可根据实验需要适当调整。
    c.在35 – 40%的功率下,超声处理样本1min(冰浴条件下进行),超声2s,间隔2s,确保细胞充分裂解,降低样本粘度。
    d.4℃下12,000rpm离心10min,取上清,待测定蛋白浓度。

    2)细胞样本处理:
    a.收集待测细胞样本,用预冷的PBS充分洗涤,洗去培养基等成分(一般建议洗涤3次)。
    b.加入适量比例的RIPA裂解液混合物(1mL RIPA裂解液中加入10μL PMSF和10μL原矾酸钠)进行冰上裂解30min。
    建议6孔板中每孔加入0.1mL RIPA裂解液(细胞中的蛋白含量可能会不同,可适当调整加入裂解液的体积)。
    c.在35 – 40%的功率下,超声处理样本1min(冰浴条件下进行),超声2s,间隔2s,确保细胞充分裂解,降低样本粘度。
    d.4℃下12,000rpm离心10min,取上清,待测定蛋白浓度。

    2. BCA法测定蛋白浓度(参见BCA蛋白浓度测定试剂盒(Cat# E-BC-K318)说明书)。

    3. 用PBS调整蛋白浓度,按照蛋白样本:5×SDS上样缓冲液=4:1的比例加入5×SDS上样缓冲液(Cat# E-BC-R288),沸水煮10min。12,000rpm离心2min,收取上清。变性后的蛋白即可进行后续的Western Blot实验,或保存于 -20℃或-80℃。

    注:待测样本建议总蛋白上样量为50μg,尽量保持各待测样本上样体积接近10μL。

    电泳

    1.根据靶蛋白的分子量的大小,配制12%的分离胶。每个泳道加入待测样本,并预留一个泳道加入5μL的预染蛋白Marker(Cat# E-BC-R273),以验证目的分子量大小及转膜程度。加入1x电泳缓冲液( Cat# E-BC-R331),开始电泳。

    2.80v恒压电泳,待溴酚蓝指示剂移动至浓缩胶与分离胶交界处成线状,改为恒压120v,跑完全程,直至电泳结束。

    转膜(湿转)

    1.根据靶蛋白的分子量选择0.45μm孔径的PVDF膜(Cat# E-BC-R266)。PVDF膜先在甲醇中浸泡1min使其活化,然后将PVDF膜浸泡于1x转膜缓冲液(Cat# E-BC-R333)中(含20%甲醇),同时将滤纸和纤维垫也浸泡在转膜缓冲液中待用。

    2.按照黑色板(负极)-纤维垫-滤纸-凝胶-PVDF膜-滤纸-纤维垫-白色板(正极)依次放好,排出气泡,夹紧后放入湿转电转槽内。建议转膜条件为150mA,1.5h。请务必保证转膜过程在低温条件下进行。

    注:此为湿转的参考步骤,如用其他转膜方法,请依具体情况进行调整。


    免疫印迹

    1.用含5% 脱脂奶粉的TBST(Cat# E-BC-R335)(封闭液)浸泡PVDF膜,室温摇床封闭1.5h

    2.用含5% 脱脂奶粉的TBST溶液按照说明书推荐的稀释比选取1:500稀释Cytochrome c1抗体,使PVDF膜浸泡于一抗孵育液中,4℃孵育过夜,并不断轻轻晃动。

    3.TBST充分洗涤PVDF膜3次,15min/每次

    4.用含2%脱脂奶粉的TBST溶液按照说明书推荐的稀释比选取1:5000稀释Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)(peroxidase/HRP conjugated)(Cat# E-AB-1003),室温摇床孵育1h。

    5.TBST充分洗涤PVDF膜3次,15min/每次

    显色曝光

    1.将ECL化学发光检测试剂盒(Cat# E-BC-R347)中的A液与B液按1:1比例混匀。

    2.PVDF膜从TBST洗液中取出后用滤纸吸干水分,均匀滴加ECL混合液于PVDF膜上,排出气泡,即可曝光。

    3.调节对比度,多次曝光获取最佳图片效果。

    附录

    Properties

    Cellular localization Mitochondrion inner membrane.
    Tissue specificity Highest expression level in diaphragm
    Isotype IgG
    Purification Antigen Affinity Purification
    Conjugation Unconjugated
    Storage instructions Store at -20℃. Avoid freeze / thaw cycles.
    Storage buffer PBS with 0.05% Proclin300, 50% glycerol, pH7.3.
    Background This gene encodes a subunit of the cytochrome bc1 complex, which plays an important role in the mitochondrial respiratory chain by transferring electrons from the Rieske iron-sulfur protein to cytochrome c. Mutations in this gene may cause mitochondrial complex III deficiency, nuclear type 6.

    Images

    • Western Blot analysis of Rat heart using Cytochrome c1 Polyclonal Antibody at dilution of 1:500

    • Western Blot analysis of Mouse heart using Cytochrome c1 Polyclonal Antibody at dilution of 1:500

    • Immunohistochemistry of paraffin-embedded Human stomach using Cytochrome c1 Polyclonal Antibody at dilution of 1:100(100×)

    • Immunohistochemistry of paraffin-embedded Human stomach using Cytochrome c1 Polyclonal Antibody at dilution of 1:100(400×)

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