High Accuracy and Absorbability Western Blot Detection Kit
中文名称：高精度及高吸附性Western Blot试剂盒
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- 应用性： WB
| 产品简介 | WB，Western Blot（免疫印迹实验）是生物科学领域检测蛋白质表达最常用和最经典的实验方法。然而由于不同实验人员所用试剂来源、操作方法和经验的区别，导致大量WB实验结果不符合文章发表要求。Elabscience专注于免疫学领域多年，积累了大量的WB操作经验。为帮助科研人员解决上述问题，现特推出Western Blot检测试剂盒。试剂盒内为经典WB实验所需试剂，包含了从蛋白提取到ECL底物曝光在内的所有试剂，具有操作简便、检测灵敏度高、背景低、系统稳定性强等优点，并提供详尽的操作说明和专业的技术支持，为您顺利做出理想的Western Blot实验结果提供了便捷和保障。
由于PVDF膜有两种孔径，分别适用于转不同分子量大小的目的蛋白；为了满足不同实验需求，我们设计了两种规格的Western Blot试剂盒： E-IR-R304A（PVDF膜0.45 μm孔径）建议用于检测分子量大于20 kDa的蛋白质； E-IR-R304B（PVDF膜0.22 μm孔径）建议用于检测分子量小于20 kDa的蛋白质。 |
| 保存条件 | 室温/ 2~8°C/-20°C，详见说明书，有效期12个月 |
| 注意事项 | 1. 本试剂盒仅用于科研，不能应用于临床。 2. 收到该试剂盒后，请按照说明书所提供的保存条件进行保存。 3. 请注意安全事项，遵守实验室试剂操作规范操作。 4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
| E-AB-1001 | Goat Anti-Mouse IgG(H+L)(peroxidase/HRP conjugated) | 500μL , 120μL , 60μL , 30μL , 1mL |
| E-AB-1003 | Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)(peroxidase/HRP conjugated) | 500μL , 120μL , 60μL , 30μL , 1mL |
| E-BC-K318-M | BCA Protein Colorimetric Assay Kit | 500Assays , 96T(80 samples) |
| E-BC-R187 | PBS Buffer, pH7.4 (10×) | 500mL , 200mL , 100mL |
| E-BC-R266 | PVDF Membrane (0.45 μm) | 8.5cm×6cm×10pieces , 8.5cm×6cm×20pieces , 13.25cm×15cm×10pieces , 13.25cm×15cm×20pieces |
| E-BC-R273 | Pre-stained Protein Marker (10~180 kDa) | 500μL , 250μL |
| E-BC-R327 | RIPA Lysis Buffer (Strong) | 100mL , 50mL , 20mL |
| E-BC-R337 | Skim Milk Powder | 50g , 10g , 5g |
| E-IR-R305 | SDS-PAGE Gel kit | 50Assays , 25Assays , 10Assays |
| E-IR-R307 | Excellent Chemiluminescent Substrate (ECL)Detection Kit | 500mL , 100mL , 50mL |
Q1:BSA做WB实验推荐什么浓度呢？
用TBST稀释，BSA浓度 2-5%。
Q2:跑胶结束后如何快速去除可能遮挡条带的溴酚蓝？
延长电泳时间可以使溴酚蓝与条带分开，对于小分子量蛋白建议更换浓度更适合的分离胶缓冲体系。
Q3:BCA浓度测得蛋白浓度3mg/ml，但加入缓冲液后发现无蛋白条带出现，是什么原因？
建议进行对比实验，设置BSA为阳性对照，与蛋白样本裂解液同时加入缓冲液混匀煮沸变性，上样进行电泳观察条带情况。
Q4:货号E-IR-R304A和E-IR-R304B的WB实验试剂盒里面是否包含E-IR-R305凝胶试剂？
E-IR-R305凝胶试剂盒是不包含在E-IR-R304A和E-IR-R304B里面的，需要单独购买凝胶试剂盒；
Q5:RIPA lysis buffer未开封在室温下存放了24小时能否继续使用？反复冻融的次数有限制吗？
本产品在室温下（25℃左右）放置24小时对产品效果无明显影响，可继续使用。但建议收货后立即分装并于-20℃保存，反复冻融次数不超过5次。
Q6:裂解液想问一下PMSF 跟Na3VO4的作用是？还有这个产品是什么浓度，如何使用？
这两个都是酶的抑制剂，作用是预防蛋白的降解。 PMSF常作为蛋白酶抑制剂被应用在生化和分子生物学实验中，是丝氨酸蛋白酶的抑制剂，可抑制胰蛋白酶（trypsin），糜蛋白酶（chymotrypsin）和AChE的活性。 Na3VO4是磷酸酶抑制剂，抑制ATP酶、碱性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶。 试剂盒这两个产品是100X的，使用前按照1:100的比例加入到PIPA裂解液中。
Q7:肿瘤组织切块在4%多聚甲醛固定液中，常温固定可以长期保存吗？
通常情况下，在4% 多聚甲醛中固定后，肿瘤组织切块可以在室温下保存数周至数月时间。对于长期保存，更好的做法是将固定后的组织样本转移到含有PBS等缓冲液的液体中，并且存放在4摄氏度的冰箱中，确保其稳定性和适用性。
Q8:提取悬浮细胞蛋白质时，能否直接加入该产品煮沸变性？
可以使用1×缓冲液直接进行煮沸，但需要注意此操作后得到的蛋白上样缓冲液不可用于BCA测浓度。
Q9:加入缓冲液的蛋白煮样时无沉淀，但第二天取出加样时有沉淀出现是因为什么呢？该如何解决？
变性后的蛋白缓冲液出现沉淀可能与蛋白样品中的离子浓度有关系，在温度变化过程中出现沉淀，可通过37℃以下的水浴孵育溶解。若仍有少量沉淀无法溶解可离心后取上清使用。
Q10:蛋白酶K使用时应该用什么溶液溶解？常用工作浓度是多少？需要在多少度下保存呢？
蛋白酶K有效pH范围为pH4.0~12.5，最佳pH范围为pH7.5-8.0。请根据实验需求尽量用上述适当pH的缓冲溶液，如：10mM Tris-HCl pH7.4-7.8，进行蛋白酶K溶液的配制。 蛋白酶K常用工作浓度为10~100ug/ml，储存液浓度一般为100~200mg/ml，-20℃保存，稀释至工作浓度后应尽快使用，避免长时间保存。
