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HIS(Histamine) ELISA Kit

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    产品货号:E-EL-0032c

    中文名:组胺(HIS)酶联免疫吸附测定试剂盒

    别称:HIS

    规格:
    • 96T
    • 48T
    数量:
    - +
    价格: ¥2400

    反应性: 通用

    检测范围: 1.56~100 ng/mL

    灵敏度: 0.94 ng/mL

    货期: 3个工作日+顺丰周期

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    用途

    该试剂盒用于体外定量检测血清、血浆或其他相关生物液体中天然及部分重组HIS浓度。

    检测原理

    本试剂盒采用竞争ELISA法。用HIS抗原包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的HIS与包被的HIS竞争生物素标记的抗HIS单抗上的结合位点,游离的成分被洗去。加入辣根过氧化物酶标记的亲和素,生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,HIS浓度与OD450值之间呈反比,通过绘制标准曲线计算出样品中HIS的浓度。

    反应类型 竞争法
    规格 96T
    反应时间 2.0h
    反应性 通用
    检测方法 Colormetric
    检测范围 1.56-100 ng/mL
    灵敏度 0.94 ng/mL
    样本体积 50μL
    样本类型 血清、血浆或其他相关生物液体

    特异性

    可检测样本中的HIS,且与其它相关蛋白无明显交叉反应。

    重复性

    板内,板间变异系数均<10%。

    典型数据

    由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。

    (ng/mL) O.D Average
    100 0.396
    0.44
    0.418
    50 0.523
    0.529
    0.526
    25 0.727
    0.705
    0.716
    12.5 0.998
    1.016
    1.007
    6.25 1.373
    1.363
    1.368
    3.13 1.724
    1.7
    1.712
    1.56 1.965
    1.977
    1.971
    0 2.299
    2.305
    2.302

    精密度

    板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
    板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。

      Intra-assay Precision Inter-assay Precision
    Sample 1 2 3 1 2 3
    n 20 20 20 20 20 20
    Mean
    (ng/mL)
    5.17 13.32 45.10 5.30 13.54 42.52
    Standard
    deviation
    0.27 0.72 1.51 0.28 0.61 1.68
    C V (%) 5.22 5.41 3.35 5.28 4.51 3.95

    回收率

    分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。

    Sample Type Range (%) Average Recovery (%)
    Serum (n=5) 90-100 95
    EDTA plasma (n=5) 87-100 93
    Cell culture media (n=5) 89-105 97

    线性

    分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。

        Serum (n=5) EDTA plasma (n=5) Cell culture media (n=5)
    1:2 Range (%) 88-102 88-103 88-100
    Average (%) 95 95 94
    1:4 Range (%) 85-98 86-101 87-99
    Average (%) 91 92 94
    1:8 Range (%) 87-98 89-100 87-99
    Average (%) 93 95 92
    1:16 Range (%) 86-99 90-104 89-102
    Average (%) 92 97 96

    试剂盒组成及保存

    未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周;如果一周以后才使用试剂盒,请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。

    中文名称 英文名称 规格 保存条件
    ELISA酶标板(可拆卸) Micro ELISA Plate(Dismountable) 8 孔×12 条 -20℃,可存放6个月
    冻干标准品 Reference Standard 2支
    浓缩生物素化抗体(100×) Concentrated Biotinylated Detection Ab 1支 120 μL
    浓缩HRP酶结合物(100×) Concentrated HRP Conjugate 1支 120 μL -20℃(避光),可存放6个月
    标准品&样品稀释液 Reference Standard & Sample Diluent 1瓶 20 mL 2-8℃.可存放6个月
    生物素化抗体稀释液 Biotinylated Detection Ab Diluent 1瓶 14 mL
    酶结合物稀释液 HRP Conjugate Diluent 1瓶 14 mL
    浓缩洗涤液(25×) Concentrated Wash Buffer (25×) 1瓶 30 mL
    底物溶液(TMB) Substrate Reagent 1瓶 10 mL 2-8℃(避光)
    反应终止液 Stop Solution 1瓶 10 mL 2-8℃
    封板覆膜 Plate Sealer 5 张
    产品说明书 Product Description 1 份
    质检报告 Certificate of Analysis 1 份

    说明:所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。
    试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些,请在使用时量取而非直接倒出。

    试验所需自备物品

    • 1.酶标仪(450nm波长滤光片)
    • 2.高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
    • 3.37℃恒温箱,双蒸水或去离子水
    • 4.吸水纸

    操作步骤

    1. 对应板孔中加入50μL标准品工作液或样本后,立即每孔加入50μL生物素化抗体工作液,37℃孵育45分钟

    2. 弃掉板内液体,洗板3次

    3. 每孔加入100μL HRP酶结合物工作液,37℃孵育30分钟,弃掉板内液体,洗板5次

    4. 每孔加入90μL底物溶液,37℃孵育15分钟左右

    5. 每孔加入50μL终止液

    6. 立即在450nm波长下读数,处理数据

    客户发表文献

    1. Anti-Allergic Effect Of Artemisia Extract In Rats.
      IF: 1.261
      Journal: Experimental and Therapeutic Medicine(2016)
      DOI: 10.3892/etm.2016.3361
      PMID: 27446332
      引用产品: E-EL-0032c 
      样本类型: Cell culture supernatant
      物种: Universal
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