本公司产品仅供体外研究使用，不用于临床诊断
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Cat.No.:E-AB-22003
| Reactivity | Application |
| Human | WB (Hela,)  Western Blot analysis of Hela cells, RAW264.7 cells, Mouse brain and Rat brain using Histone H3 Monoclonal Antibody at dilution of 1:5000. (uterus,)  Immunohistochemistry of paraffin-embedded Human uterus tissue using Histone H3 Monoclonal Antibody at dilution of 1:200. |
| Rat |
WB (brain,) Western Blot analysis of Hela cells, RAW264.7 cells, Mouse brain and Rat brain using Histone H3 Monoclonal Antibody at dilution of 1:5000. (liver,)  Immunofluorescence analysis of Rat liver tissue using Histone H3 Monoclonal Antibody at dilution of 1:200. |
| Mouse |
WB (RAW264.7,brain,) Western Blot analysis of Hela cells, RAW264.7 cells, Mouse brain and Rat brain using Histone H3 Monoclonal Antibody at dilution of 1:5000. Western Blot analysis of Hela cells, RAW264.7 cells, Mouse brain and Rat brain using Histone H3 Monoclonal Antibody at dilution of 1:5000. |
WB 1:500-1:2000, IHC 1:50-300, IF 1:100-500, IP 1:100-1:300
1.样本的处理
1)组织样本的处理：
a) 取待测组织样本，用预冷的PBS（0.01 M, pH=7.4）(Cat# E-BC-R187) 充分洗涤，洗去组织表面血液及内部杂物。
b) 称重剪碎，加入适量比例的RIPA裂解液混合物 (Cat# E-BC-R327)（1mL的RIPA裂解液中加入10μL PMSF（Cat# E-BC-R287）和10μL原矾酸钠（Cat# E-BC-R250）进行匀浆裂解。建议按组织重量：RIPA体积=3:10的比例匀浆，例如0.3g的组织样本对应1mL的RIPA裂解液，具体体积可根据实验需要适当调整。
c) 在35~40％的功率下，超声处理样本1min（冰浴条件下进行），每次2s，间隔2s，确保细胞充分裂解，降低样本粘度。
d) 4℃下12,000rpm离心10min。
e) 取上清，待测定蛋白浓度。
2)细胞样本处理：
a) 收集待测细胞样本，用预冷的PBS（0.01 M, pH=7.4）充分洗涤，洗去培养基等成分（一般建议洗涤3次）。
b) 加入适量比例的RIPA裂解液混合物（1mL RIPA裂解液中加入10μL PMSF和10μL原矾酸钠）进行冰上裂解。建议6孔板中每孔加入0.1mL RIPA裂解液（细胞中的蛋白含量可能会不同，可适当调整加入裂解液的体积）。
c) 在35~40％的功率下，超声处理样本1min（冰浴条件下进行），每次2s，间隔2s，确保细胞充分裂解，降低样本粘度。
d) 4℃下12,000rpm离心10min。
e) 取上清，待测定蛋白浓度。
2.BCA法测定蛋白浓度（参见BCA蛋白浓度测定试剂盒（Cat# E-BC-K318）说明书）。
3. 用PBS调整蛋白浓度，按照蛋白样本：5×SDS上样缓冲液=4:1的比例加入5×SDS上样缓冲液（Cat# E-BC-R288），沸水煮10min。12,000rpm离心2min，收取上清。变性后的蛋白即可进行后续的Western Blot实验，或保存于 -20℃或-80℃。
1.根据靶蛋白的分子量的大小，配制 0% 的分离胶。每个泳道加入待测样本，并预留一个泳道加入5μL的预染蛋白Marker (Cat# E-BC-R273)，以验证转膜程度及目的分子量大小。加入电泳缓冲液 ( Cat# E-BC-R331)，开始电泳。
2.80V恒压电泳，待溴酚蓝指示剂移动至浓缩胶与分离胶交界处成线状，改为恒压120v，跑完全程。
1.根据靶蛋白的分子量选择 μm 孔径的PVDF膜（Cat# E-BC-R266）。PVDF膜先在甲醇中浸泡1min使其活化，然后将PVDF膜浸泡于转膜缓冲液（Cat# E-BC-R333）中。同时将滤纸和纤维垫也浸泡在转膜缓冲液中待用。
2.遵照转膜仪生产商的说明进行湿转、半干转或干式转印。
1.用含5% 脱脂奶粉（Cat# E-BC-R337）的TBST（Cat# E-BC-R335）（封闭液）浸泡PVDF膜，室温摇床封闭。
2.用含5% 脱脂奶粉的TBST溶液按照说明书推荐的稀释比选取稀释IMP3抗体，使PVDF膜浸泡于一抗孵育液中，4℃孵育过夜，并不断轻轻晃动。
3.TBST充分洗涤PVDF膜 .
4.用含2%脱脂奶粉的TBST溶液（配比见附录）按照说明书推荐的稀释比选取稀释Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)(peroxidase/HRP conjugated)（Cat# E-AB-1003），室温摇床孵育1 h。
5.TBST充分洗涤PVDF膜 .
1.PVDF膜从TBST洗液中取出后用滤纸吸干水分。
2.将ECL化学发光检测试剂盒（Cat# E-BC-R347）中的A液与B液按1:1比例混匀，均匀滴加于PVDF膜上，排出气泡，即可曝光。
3.调节对比度，多次曝光获取最佳图片效果。
| Clonality | Monoclonal |
| Isotype | IgG |
| Concentration | 1mg/mL |
| Storage | Store at -20℃. Avoid freeze / thaw cycles. |
| Buffer | PBS with 0.02% sodium azide, 50% glycerol, pH7.4 |
| Purification Method | Protein A purification |
| Research Areas | Cancer, Epigenetics and Nuclear Signaling |
| Clone No. | Clone:5B1 |
| Conjugation | Unconjugated |
| Immunogen | Recombinant Protein |
| Abbre | Histone H3 |
| Synonyms | HIST1H3A,H3FA,HIST1H3B,H3FL,HIST1H3C,H3FC,HIST1H3D,H3FB,HIST1H3E,H3FD,HIST1H3F,H3FI,HIST1H3G,H3FH,HIST1H3H,H3FK,HIST1H3I,H3FF,HIST1H3J,H3FJ,Histone H3.1,Histone H3/a,Histone H3/b,Histone H3/c,Histone H3/d,Histone H3/f,Histone H3/ |
| Swissprot | P68431,Q71DI3,P84243 |
| Calculated MW | 15kDa |
| Observed MW | 15kDa |
| Cellular Localization | Extracellular region or secreted,extracellular exosome,extracellular region,Nucleus,nuclear chromosome,nuclear chromosome, telomeric region,nuclear nucleosome,nucleoplasm,nucleus,Other locations:nucleosome,protein complex |
| Application | Products |
| WB | Western Blot Detection Kit(E-IR-R304) |
| IHC | 2-step plus Poly-HRP Anti Mouse/Rabbit IgG Detection System (with DAB solution)(E-IR-R217) |
| Core component of nucleosome. Nucleosomes wrap and compact DNA into chromatin, limiting DNA accessibility to the cellular machineries which require DNA as a template. Histones thereby play a central role in transcription regulation, DNA repair, DNA replication and chromosomal stability. DNA accessibility is regulated via a complex set of post-translational modifications of histones, also called histone code, and nucleosome remodeling. |
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