Mouse ENG Antibody Pair Set
Price:
- 反应性： Mouse
| Background |
Endoglin (CD105) is a 90 kDa type I transmembrane glycoprotein of the zona pellucida (ZP) family of proteins. Endoglin and betaglycan/T beta RIII are type III receptors for TGF beta superfamily ligands,sharing 71% aa identity in the transmembrane (TM) and cytoplasmic domains. Endoglin is highly expressed on proliferating vascular endothelial cells,chondrocytes,and syncytiotrophoblasts of term placenta,with lower amounts on hematopoietic,mesenchymal and neural crest stem cells,activated monocytes,and lymphoid and myeloid leukemic cells. Human endoglin cDNA encodes 658 amino acids (aa) including a 25 aa signal sequence,a 561 aa extracellular domain (ECD) with an orphan domain and a two-part ZP domain,a TM domain and a 47 aa cytoplasmic domain. An isoform with a 14 aa cytoplasmic domain (S-endoglin) can oppose effects of long (L) endoglin. The human endoglin ECD shares 65-72% aa identity with mouse,rat,bovine,porcine and canine endoglin. Endoglin homodimers interact with TGF-beta 1 and TGF-beta 3 (but not TGF-beta 2),but only after binding T beta RII. Similarly,they interact with Activin A and BMP-7 via activin type IIA or B receptors,and with BMP-2 via BMPR-IA/ALK-3 or BMPR-IB/ALK-6. BMP-9,however,is reported to bind endoglin directly. Endoglin modifies ligand-induced signaling in multiple ways. For example,expression of endoglin can inhibit TGF-beta 1 signals but enhance BMP 7 signals in the same myoblast cell line
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| Synonyms |
CD105;END;HHT1;ORW;ORW1
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| Swissprot | |
| Reactivity |
Mouse
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| Specificity |
Detects Mouse ENG in ELISAs
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| Buffer |
Capture Antibody:PBS with 0.04% Proclin 300, 50% glycerol, pH 7.4; Detection Antibody:PBS with 0.04% Proclin 300, 1% protective protein, 50% glycerol, pH 7.4
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| Storage |
-20℃
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| Expiration date |
12个月
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Q1:说明书中的标曲可以直接用来样本计算吗？
说明书上的标曲是指示标曲，主要是用于呈现拟合后标曲的形态以及最高/最低OD值的质控范围，不能直接使用。此外，受实验操作、实验环境以及仪器参数设定等因素的影响，实际操作获得的标曲OD值可能会跟说明书不完全一致（整体偏高或偏低），这种情况，建议通过在显色阶段控制前4个蓝色孔有明显颜色梯度，标曲最大OD值在1.2以上，以及标曲的相关系数在0.99以上，作为有效标曲。
Q2:ELISA试验是否需要技术重复？阳性或阴性对照如何设置？
建议客户做技术重复，一方面确认操作手法，一方面验证和提高实验结果的准确性。 ELISA实验中的阳性对照可以认为就是标准品。阴性对照是与待捡物具有同源性和同质性的空白基质或者已知浓度很低的基质溶液，一般较难获取，如果有可以设置为阴性对照。常规是设定空白对照，即样本稀释液。
Q3:组织/细胞样本处理中提到的“反复冻融”过程该如何操作？
组织样本：组织研磨后，将其-80℃放置1小时/液氮放置0.5小时，然后置于30℃水浴锅中轻微振荡使其迅速融化，此操作反复1-2次即可。 细胞样本：按上述冻融的操作反复2-3次。若为膜蛋白可以适当超声一下，但需要控制好超声的温度和频率。 样本中建议提前加入蛋白酶抑制剂。常规推荐：PMSF(Cat.E-EL-SR002)。
Q4:如何进行超声操作？
使用超声波细胞破碎器超声处理悬浮液来裂解细胞（参考：用Soniprep150超声波发生器以振幅14μm超声处理30秒，破碎细胞；或者用超声破碎仪，200W，2秒/次，间隙3秒，总时间3-5分钟或者400A，5秒/次，间隙10秒，反复3-5次）。再于2-8℃，以1500×g离心10分钟，去除细胞碎片，收集上清液。超声过程中注意控制温度。
Q5:稀释方案
稀释100倍：一步稀释。取5μl样本到495μl标准品&样本稀释液内，做100倍稀释； 稀释1000倍：两步稀释。取5μl样本到95μl标准品&样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μl 20倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍； 稀释100000倍：三步稀释。取5μl样本到195μl标准品&样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μl 40倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μl 2000倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍； 每步稀释时取液量不少于3μl，稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀，避免起泡。
Q6:ELISA实验是否需要设置复孔？
为了保证实验结果的准确性，建议标准品和样品都做复孔检测。当然，ELISA实验并非要求一定做复孔/3复孔，客户可根据自己的需求设置实验的复孔与否。
