本公司产品仅供体外研究使用，不用于临床诊断
本公司产品仅供体外研究使用，不用于临床诊断
该试剂盒用于体外定量检测Mouse 血清，血浆或其他生物体液中HMGB-1浓度
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠HMGB-1抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的小鼠HMGB-1会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠HMGB-1抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠HMGB-1抗体与结合在包被抗体上的小鼠HMGB-1结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，HMGB-1浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中HMGB-1的浓度。
| 反应类型 | 夹心法 |
| 规格 | 96T |
| 反应时间 | 3.5h |
| 反应性 | Mouse |
| 检测方法 | Colormetric |
| 检测范围 | 15.63—1000 pg/mL |
| 灵敏度 | 9.38 pg/mL |
| 样本体积 | 100μL |
| 样本类型 | 血清，血浆或其他生物体液 |
可检测样本中的小鼠HMGB-1，且与其它相关蛋白无明显交叉反应。
板内，板间变异系数均<10%。
由于实验操作条件的不同（如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等），标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
| Mean (pg/mL) |
50.50 | 98.56 | 334.18 | 52.21 | 95.09 | 337.87 |
| Standard
deviation |
2.65 | 4.51 | 17.78 | 3.53 | 5.30 | 13.18 |
| C V (%) | 5.25 | 4.58 | 5.32 | 6.76 | 5.57 | 3.90 |
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|---|---|
| Serum (n=8) | 92-105 | 99 |
| EDTA plasma (n=8) | 88-103 | 94 |
| Cell culture media (n=8) | 83-98 | 90 |
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍，4倍，8倍，16倍做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
|---|---|---|---|---|
| 1:2 | Range (%) | 91-104 | 96-110 | 87-97 |
| Average (%) | 97 | 103 | 92 | |
| 1:4 | Range (%) | 90-104 | 84-98 | 85-98 |
| Average (%) | 97 | 90 | 91 | |
| 1:8 | Range (%) | 90-101 | 84-96 | 82-95 |
| Average (%) | 95 | 89 | 88 | |
| 1:16 | Range (%) | 90-106 | 81-95 | 82-94 |
| Average (%) | 98 | 87 | 87 |
未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周；如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。
| 中文名称 | 英文名称 | 规格 | 保存条件 |
|---|---|---|---|
| ELISA酶标板(可拆卸) | Micro ELISA Plate(Dismountable) | 8 孔×12 条 | -20℃，可存放6个月 |
| 冻干标准品 | Reference Standard | 2 支 | |
| 浓缩生物素化抗体(100×) | Concentrated Biotinylated Detection Ab | 1支 120 μL | |
| 浓缩HRP酶结合物(100×) | Concentrated HRP Conjugate | 1支 120 μL | -20℃(避光)，可存放6个月 |
| 标准品&样品稀释液 | Reference Standard & Sample Diluent | 1瓶 20 mL | 2-8℃.可存放6个月 |
| 生物素化抗体稀释液 | Biotinylated Detection Ab Diluent | 1瓶 14 mL | |
| 酶结合物稀释液 | HRP Conjugate Diluent | 1瓶 14 mL | |
| 浓缩洗涤液(25×) | Concentrated Wash Buffer (25×) | 1瓶 30 mL | |
| 底物溶液(TMB) | Substrate Reagent | 1瓶 10 mL | 2-8℃(避光) |
| 反应终止液 | Stop Solution | 1瓶 10 mL | 2-8℃ |
| 封板覆膜 | Plate Sealer | 5 张 | |
| 产品说明书 | Product Description | 1 份 | |
| 质检报告 | Certificate of Analysis | 1 份 |
说明：所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。
试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。
|
1. 对应板孔中加入100μL标准品工作液或样本，37℃孵育90分钟 |
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2. 弃掉板内液体后，立即加入100μL生物素化抗体工作液，37℃孵育60分钟 |
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3. 弃掉板内液体，洗板3次 |
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4. 每孔加入100μL HRP酶结合物工作液，37℃孵育30分钟，弃掉板内液体，洗板5次 |
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5. 每孔加入90μL底物溶液，37℃孵育15分钟左右 |
|
6. 每孔加入50μL终止液 |
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7. 立即在450nm波长下读数，处理数据 |
费*士Submitted [ Jul 27 2022 ]
问: 细胞培养上清忘记离心了，检测实验组数据不太对，是因为杂质和细胞碎片没离心吗
回复
adminSubmitted [ Jul 27 2022 ]
回答: ELISA 的样本都是均质澄清的溶液，杂质和细胞碎片会影响抗原抗体的结合，导致检测结果不准确。
adminSubmitted [ Jul 27 2022 ]
回答:
费*士Submitted [ Jul 27 2022 ]
问: 细胞培养上清忘记离心了，检测实验组数据不太对，是因为杂质和细胞碎片没离心吗
回复
adminSubmitted [ Jul 27 2022 ]
回答: 是的，ELISA的样本是均质溶液，里面含有杂质和细胞碎片会影响抗原抗体的结合，会导致结果不准确。
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