TGF-β1(Transforming Growth Factor Beta 1) ELISA Kit

用途

该试剂盒用于体外定量检测血清、血浆或其他相关生物液体中TGF-β1浓度。

背景介绍

转化生长因子β1 (TGF-β1)是一种具有强力抗炎特性的多效性细胞因子，由于其参与脂质代谢、高血压和动脉粥样硬化的病理生理进程，被认为是缺血性卒中(IS)炎症反应过程中重要的高危因素。TGF-β1的基因位于19号染色体 (q13.1-13.3)，包括7个外显子和6个内含子。TGF-β1蛋白遍布全身，在构成骨架的组织中尤为丰富，在早期发育过程中，骨架由强韧而富有弹性的骨骼和软骨组织构成，TGF-β1可以帮助调节这些组织的形成与发育。TGF-β1还参与了血管的形成，肌肉和脂肪组织的发育，伤口的愈合，免疫系统中的炎症反应进程并能预防肿瘤的生长。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗TGF-β1抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的TGF-β1会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗GF-β1抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗TGF-β1抗体与结合在包被抗体上的TGF-β1结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，TGF-β1浓度与OD₄₅₀值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中TGF-β1的浓度。

样品活化方法

生物样品中的通常以无活性的形式存在，在检测TGF-β1活性前必须进行活化处理。

活化方法如下：

血清、血浆： 280 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品，混匀，加入40 μL活化试剂1，室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2，混匀后立即检测。

注意：样品被稀释了10倍！

细胞培养上清：20 μL标准品&样品稀释液中加入100 μL样品，混匀，加入40 μL活化试剂1，室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2，混匀后立即检测。

注意：样品被稀释了2倍！

样本值

血清/血浆：本实验对来自健康的人、大小鼠等样本进行了TGF-β1水平检测。

典型数据

以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。

精密度

板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。

回收率

分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围和平均回收率。

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