中文名:转化生长因子β1(TGF-β1)酶联免疫吸附测定试剂盒
别称:Cartilage-inducing factor,CED,Differentiation inhibiting factor,DPD1,LAP,Latency-associated peptide,Prepro transforming growth factor beta 1,TGF beta 1,TGF beta,TGF beta 1 protein,TGF-beta 1 protein,TGF-beta-1,TGF-beta-5,TGF-beta1,TGFB,Tgfb-1,tgfb1,TGFB1,TGFbeta,TGFbeta1,Transforming Growth Factor b1,Transforming Growth Factor beta 1,Transforming growth factor beta 1a,transforming growth factor beta-1,transforming growth factor,beta 1,Transforming Growth Factor-ß1
反应性: Universal
检测范围: 0.16~10 ng/mL
灵敏度: 0.10 ng/mL
用途
该试剂盒用于体外定量检测血清、血浆或其他相关生物液体中TGF-β1浓度。
背景介绍
转化生长因子β1 (TGF-β1)是一种具有强力抗炎特性的多效性细胞因子,由于其参与脂质代谢、高血压和动脉粥样硬化的病理生理进程,被认为是缺血性卒中(IS)炎症反应过程中重要的高危因素。TGF-β1的基因位于19号染色体 (q13.1-13.3),包括7个外显子和6个内含子。TGF-β1蛋白遍布全身,在构成骨架的组织中尤为丰富,在早期发育过程中,骨架由强韧而富有弹性的骨骼和软骨组织构成,TGF-β1可以帮助调节这些组织的形成与发育。TGF-β1还参与了血管的形成,肌肉和脂肪组织的发育,伤口的愈合,免疫系统中的炎症反应进程并能预防肿瘤的生长。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗TGF-β1抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的TGF-β1会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗GF-β1抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗TGF-β1抗体与结合在包被抗体上的TGF-β1结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,TGF-β1浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中TGF-β1的浓度。
反应类型 |
夹心法 |
规格 |
96T |
反应时间 |
3.5h |
反应性 |
通用 |
检测方法 |
Colormetric |
检测范围 |
0.16—10 ng/mL |
灵敏度 |
0.10 ng/mL |
样本体积 |
100μL |
样本类型 |
血清、血浆或其他相关生物液体 |
特异性 |
可检测样本中的TGF-β1,且与其它相关蛋白无明显交叉反应 |
重复性 |
板内,板间变异系数均<10% |
样品活化方法
生物样品中的通常以无活性的形式存在,在检测TGF-β1活性前必须进行活化处理。
活化方法如下:
血清、血浆: 280 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品,混匀,加入40 μL活化试剂1,室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2,混匀后立即检测。
注意:样品被稀释了10倍!
细胞培养上清:20 μL标准品&样品稀释液中加入100 μL样品,混匀,加入40 μL活化试剂1,室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2,混匀后立即检测。
注意:样品被稀释了2倍!
样本值
血清/血浆:本实验对来自健康的人、大小鼠等样本进行了TGF-β1水平检测。
样本类型 |
样本来源 |
样本值范围 |
稀释倍数 |
血清 |
健康人(n=10) |
22.8-46.1 ng/mL |
10 |
血浆 |
健康人(n=10) |
12.7-43.1 ng/mL |
10 |
血清 |
健康小鼠(n=10) |
66.1-82.9 ng/mL |
10 |
血清 |
健康大鼠(n=10) |
35.4-66.5 ng/mL |
10 |
血清 |
健康猪(n=5) |
4.9-10.2 ng/mL |
10 |
血清 |
健康兔(n=5) |
2.9-6.5 ng/mL |
10 |
血清 |
健康犬(n=5) |
34.5-84.2 ng/mL |
10 |
典型数据
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
ng/mL |
10 |
5 |
2.5 |
1.25 |
0.63 |
0.32 |
0.16 |
0 |
OD |
2.515 |
1.645 |
0.988 |
0.506 |
0.271 |
0.183 |
0.111 |
0.057 |
校正OD |
2.458 |
1.588 |
0.931 |
0.449 |
0.214 |
0.126 |
0.054 |
- |
精密度
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
|
批内变异系数 |
批间变异系数 |
||||
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
数量 |
20 |
20 |
20 |
20 |
20 |
20 |
平均值( MERGEFIELD 单位ng/mL) |
0.41 |
1.07 |
4.96 |
0.47 |
1.25 |
4.24 |
标准差 |
0.02 |
0.05 |
0.22 |
0.03 |
0.06 |
0.2 |
变异系数 (%) |
4.88 |
4.67 |
4.43 |
6.38 |
4.8 |
4.72 |
回收率
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
样本类型
|
回收率范围 (%) |
平均回收率 (%) |
血清(n=5)
|
94-110 |
102 |
血浆(EDTA)(n=5)
|
90-102 |
96 |
细胞上清(n=5)
|
95-106 |
98 |
S****rSubmitted [ Feb 25 2023 ]
问: TGF β标准品需要活化吗 为什么样品复孔间差异特别大
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