Western Blot Stripping Buffer (Neutral)
中文名称：Western一抗二抗去除液 (中性)
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- 应用性： WB
| 产品简介 | Western一抗二抗去除液（Stripping buffer），用于Western Blot中已转移了蛋白的膜的重新利用。在已完成一次一抗二抗结合和后续的ECL曝光后，如还需用此膜的样本进行一些内参蛋白或其他蛋白的验证，可以使用此产品对膜上已结合的一抗二抗进行充分洗脱。确保之前的一抗信号被清除后，可以对膜进行内参抗体或者其他抗体的再次孵育，从而进行二次验证。节省了再次配制SDS-PAGE凝胶及转膜时间，同时也节约了实验的样本。
使用本试剂只需要30 min即可实现蛋白膜的重复利用。可消除因重新上样带来的误差，使实验间的可比性更强。 |
| 保存条件 | 2~8°C保存，保质期12个月。 |
| 注意事项 | 1. 用本品浸洗PVDF膜时会出现膜变透明，属正常现象，洗脱完毕后用TBST冲洗PVDF膜后恢复原状。 2. 为取得最佳效果，本一抗二抗去除液产品推荐使用PVDF膜。 3. 本产品适用于ECL或类似的化学发光试剂进行的Western Blot检测，使用非化学发光试剂进行的Western Blot检测，如DAB等，不适用本试剂。 4. 使用Western一抗二抗去除液多次重复使用同一张膜，可能会导致蛋白信号的减弱。本Western一抗二抗去除液，经过多个抗体的检测试验，通常可以重复利用膜1~2次。 5. 因多次清洗PVDF膜可能导致蛋白信号渐弱，建议实验设计先检测表达量较低的蛋白，用去除液清洗后再次检测表达量高的蛋白，如内参蛋白等。 6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
Q1:抗体去除液洗脱抗体时对温度是什么要求？同一张膜能否多次洗脱？
本产品使用时，将去除液恢复值室温时即可使用；同一张膜可进行抗体清除1~2次，通常以1次为宜。
Q2:可否用于非变性电泳？
不能，本产品含有DTT等还原剂，不可用于非变性电泳中。
Q3:若要使用此TBS配制TBST，吐温需要加入多少的量呢？
使用本产品配制TBST时，控制吐温终浓度为0.1%即可。
Q4:请问RIPA蛋白裂解液100ul差不多裂解多少细胞？
大约可裂解1X 10^6个细胞，如果使用孔板操作，建议6孔板中每孔加入100-150 μL RIPA裂解液。
Q5:这款缓冲液主要成分有哪些呢？
本款产品中主要成分为Tris-HCl、溴酚蓝、SDS、DTT、甘油等。
Q6:裂解液裂解不开，加入ripa后震荡，然后冰上裂解20分钟再离心，得到的是一团粘稠的液体？
RIPA裂解液裂解细胞后，细胞核内的DNA比较完整的弥散到样本里，形成一团黏糊糊的液体，遇到这种情况裂解后可再超声处理，在35~40％的功率下，超声处理样本1 min（冰浴条件下进行），超声2 s，间隔2 s，确保细胞充分裂解，降低样本粘度。
Q7:EDTA抗原修复液稀释后的pH需要再次进行调整吗？
本产品在使用时直接按说明书稀释至工作液浓度即可，无需额外调节pH值。
Q8:细胞裂解液裂解细胞后续做免疫共沉淀可以吗?
不可以, 免疫共沉淀的细胞裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液，常规的RIPA裂解含有SDS，会对蛋白产生变性作用，对蛋白间的相互作用有影响。做免疫共沉淀推荐使用不含变性剂的裂解液。
Q9:裂解液不加矾酸钠可以用吗？
如果是做磷酸化抗体，是必须加矾酸钠抑制剂，如果是做的普通抗体可以只加PMSF（蛋白酶抑制剂）。
Q10:若蛋白含有高分子杂带，可能存在二聚体，是否需要加入倍量缓冲液以打开二聚体？
如果蛋白样品中含有比较多的二聚体，可以添加还原剂DTT以帮助打开二聚体。
