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免疫细胞 | Treg细胞功能、鉴定方法及意义,文中有检测实例!

Source: Elabscience®Published: 2024-11-01

在前两期的流式课堂中,我们分别探讨了Th1和Th2细胞,以及Th17细胞在免疫反应中的角色。今天,我们将转向另一种关键的T细胞亚群——调节性T细胞(Treg细胞)。在免疫系统的复杂网络中,Treg细胞以其独特的免疫抑制功能,扮演着维护机体免疫平衡的关键角色。那么,Treg细胞是如何工作的?又是如何鉴定的?接下来和小E老师一起开始这次对Treg细胞的深入探索之旅吧!

一、Treg细胞简介

Treg细胞,全称调节性T细胞(Regulatory T cells),是一类具有显著免疫抑制作用的T细胞亚群。当机体在面对外来入侵的细菌、病毒等有害物质时,会产生免疫应答反应。部分免疫细胞(如T细胞及B细胞)会识别和清除有害物质,从而保护机体。然而,过度的免疫应答反应会损伤机体自身,在免疫细胞识别和清除了有害物质后,Treg细胞会发出攻击停止信号,通过释放免疫抑制性细胞因子和杀伤分子,抑制效应性T细胞增殖,同时诱导效应性T细胞凋亡,对免疫反应进行调节。Treg细胞在机体免疫反应过程中不可或缺,它可调节机体免疫稳态,从而阻止自身免疫性疾病。


图1. Treg细胞发育流程

二、Treg细胞鉴定方法介绍
在许多免疫疾病研究中,常常需要检测Treg细胞,对机体的免疫情况进行研究。要检测淋巴细胞中的Treg细胞,可以通过流式细胞术和流式抗体进行检测。目前最常用的鉴别Tregs的标志Marker是CD4、CD25、CD127和Foxp3。以下为检测人和小鼠Treg细胞的参考案例。

小鼠脾脏Treg(3色)检测
Panel Design &样本管设置:

目的

样本

设置

调电压

1

Blank(空白管)

调补偿

2

CD4-FITC

3

CD25-APC

4

Foxp3-PE

APC-FMO联合同型对照划门

5

CD4-FITC、Foxp3-PE、Rat IgG1, κ Isotype Control-APC

PE-FMO联合同型对照划门

6

CD4-FITC、CD25-APC、Mouse IgG1, κ Isotype Control-PE

Full Panel

7

CD4-FITC、CD25-APC、Foxp3-PE

流式抗体信息:

指标

荧光标记

克隆号

货号

CD4

FITC

GK1.5

E-AB-F1097C

CD25

APC

PC-61.5.3

E-AB-F1102E

Foxp3

PE

3G3

E-AB-F1238D

Rat IgG1, κ Isotype Control

APC

HRPN

E-AB-F09822E

Mouse IgG1, κ Isotype Control

PE

MOPC-21

E-AB-F09792D


图2. 小鼠Treg细胞检测实验结果图

人外周血Treg(6色)检测
Panel Design &样本管设置:

目的

样本

设置

调电压

1

Blank(空白管)

调补偿

2

CD45-Elab Fluor® Violet 450

3

CD3-Elab Fluor® Red 780

4

CD4-FITC

5

CD8a-PerCP/Cyanine5.5

6

CD25-PE

7

CD127-Elab Fluor®647

Full Panel

8

CD45-Elab Fluor® Violet 450、CD3-Elab Fluor® Red 780CD4-FITCCD8a-PerCP/Cyanine5.5CD25-PECD127-Elab Fluor®647


流式抗体信息:

指标

荧光标记

克隆号

货号

CD45

Elab Fluor® Violet 450

HI30

E-AB-F1137Q

CD3

Elab Fluor® Red 780

OKT3

E-AB-F1001S

CD4

FITC

RPA-T4

E-AB-F1109C

CD8a

PerCP/Cyanine5.5

OKT-8

E-AB-F1110J

CD25

PE

BC96

E-AB-F1194D

CD127

Elab Fluor®647

A019D5

E-AB-F1152M


图3. 人Treg细胞检测实验结果图

 
除了流式细胞术检测外,也可以通过一些分子生物学方法,如实时
PCR检测Foxp3基因的表达水平来进行检测Treg细胞。

 

三、Treg细胞鉴定意义及应用

自身免疫性疾病:检测及关注淋巴细胞内Treg细胞状态,可以帮助研究多种领域疾病,如I型糖尿病等,这些自身免疫性疾病与Treg细胞相关。

炎症:Treg细胞可以分泌细胞抗炎因子抑制自身炎症反应,防止引起组织破坏的病理性免疫应答发生。Treg细胞功能缺陷或缺失可直接导致炎症性疾病的出现。因此,在炎症类疾病中,Treg细胞发挥着重要的作用。

肿瘤研究:在关于肿瘤的研究中发现,Treg细胞可通过免疫抑制作用,使机体对肿瘤细胞产生抗原耐受,使得肿瘤细胞逃脱机体的免疫杀伤作用,导致免疫逃逸。因此,在关于肿瘤治疗的研究中,Treg细胞的鉴定及检测也具有重要的意义。

以上就是本期关于Treg细胞的介绍,大家有相关问题欢迎大家留言!更多免疫细胞干货,请继续关注流式课堂。



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