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流式抗体到底怎么选?要注意哪些问题?

Source: Elabscience®Published: 2019-07-24

流式细胞术是一项非常实用的技术,其特点是方便快捷,结果准确,且能成功的对目标细胞进行分选,但是提起流式抗体具体要怎么选,估计很多小伙伴都会犯难,确实,想获得一个漂亮的流式结果图没有那么容易,实验前最需要考虑的是抗体的选择和荧光素的搭配。

选流式抗体需注意哪些问题?

抗体的基本要求

a. 清楚知道待测靶标是胞内还是胞外蛋白;

b. 严格按照样品来源选择抗体反应性;

c. 必须选择明确标注可用于流式实验的抗体,不能用普通抗体代替。

流式细胞仪的要求

a.了解所用的流式细胞仪有几个激光器,常见的激光器有405nm、488nm和633nm等,目前大部分的流式细胞仪都配有488nm和633nm2个激光器;

b. 知道每个激光器下有几个检测通道,通道数决定一次最多测多少个指标;

荧光标记的选择

a. 有直标抗体的话,尽量选直标,间接标记二抗增加实验步骤,多次清洗造成会细胞损失,染色准确性也低;

b. 弱表达靶标,尽量选择强荧光素标记抗体,PE>APC>FITC>PerCP
多色搭配方案

a. 每个通道只能用一种标记,如FITC和AF488,两种标记的激发波长和发射波长均相近,所以不能同时用这两种标记;

b. 尽量减少光谱重叠,如PE-cy5和APC,两者同用时调补偿值过大;

c. 弱靶标配强荧光素,如Treg细胞中CD4表达量高于FoxP3,所以FoxP3应使用强荧光素标记抗体;

d. 五色及以上配色建议查阅文献,或者咨询抗体厂商。
如何调补偿?

多色流式实验,由于各个荧光素存在光谱的重叠,因此需要进行补偿调节,下图为FITC和PE两种荧光素的光谱图,在550nm附近,两种染料存在光谱重叠。

下图为CD3-FITC,CD4-PE的染色补偿调节过程,调补偿最简单的一个词就是:“横平竖直”,慢慢理解哦!

同型对照?

同型对照的目的是为了减少背景干扰,更好展现抗原与抗体的结合强度,尤其对于一些胞内蛋白、低表达或连续表达蛋白,同型对照的设置显得尤为必要。同型对照需要选择与染色的单克隆抗体相同种属来源,相同抗体亚型,相同荧光标记的抗体。

推荐:Elabscience® 流式抗体——性价比更高的流式实验整体解决方案

Elabscience®精选了文献中多次报道的克隆号作为流式细胞抗体的来源,抗人/大鼠/小鼠等,并且指标丰富,已上线指标> 1480个,覆盖大部分常见流式抗体,并且已有12种荧光标记,可以满足多种实验种需求。

另外,所有荧光抗体均提供便捷的Test规格,方便您直接使用,最重要的一点,Elabscience®还可以免费定制流式配色方案,让您的多色实验再也不用发愁。

产品示例图:

图:六个指标同时检测,所有指标的阴阳性细胞群均能得到充分分离

温馨提醒:
Elabscience®流式抗体拥有多种染料和广泛的细胞内外靶标供您选择,并且已针对标记能力和亲和能力进行了验证。按靶标、反应种属及标记物进行搜索,即可快速找到您需要的内容,您也可以点击右方的在线咨询,专业的技术人员将为您提供解答。


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