数据对不上？细胞周期&CCK-8结果关联性分析

你有这样的经历吗？做了大半年的实验，CCK-8、周期、凋亡、ELISA……实验做了一大堆，结果一分析，数据全都对不上。

· 处理后CCK-8检测显示，明显有抑制增殖的效果

· 但是凋亡检测发现，处理后凋亡率反而下降了

· 周期检测中各组更是没有任何变化

先别着急，真相往往隐藏在这看似“冲突”的实验结果中，也许你的结果没有任何问题。

今天Elabsciecne流式课堂给大家分享：CCK-8与细胞周期结果之间的关系

要分析这两个实验结果的关系，我们首先得准确知道每个实验结果的真实含义。

有人可能就会说了，这还不简单嘛，CCK-8表示细胞增殖速度，细胞周期检测结果表示细胞周期中各时期的比例。对此，我只能说：对了，但不完全对。

准确来说，CCK-8检测的是样本中脱氢酶总活力，细胞周期检测的是每个细胞的核酸含量。

                                         ▲ CCK-8检测原理示意图

                                         ▲ 周期检测原理示意图

只有从这个层面去看待我们的实验结果，才能找到问题的根本。

根据实验原理，我们可以得知，通过CCK-8检测到OD值发生了变化，可能是由以下原因造成：

OD值升高	OD值降低
细胞数量增加	细胞数量降低
细胞活力增加	细胞活力降低
实验体系中存在还原剂	实验体系中存在氧化剂
加入药物呈黄色或浑浊	实验体系中含有金属离子
……	……

同样地，细胞周期检测出现异常，也可以从实验原理中找到合理的解释。核酸所指的除了细胞核中的DNA外，还包含RNA等多种物质，这些物质都可以与PI结合，从而影响结果分析。更多细胞周期检测异常情况分析及解决方案的相关知识，请点击跳转阅读细胞周期检测三大常见问题及解决方案。

在分析CCK-8与周期关系之前，我们首先需要排除异常原因带来的结果变化。如：

1 样本中含有氧化还原剂/金属离子/有色药物等，在进行CCK-8检测前，应先进行换液；

2 在进行细胞周期检测时，应注意控制细胞接种密度，培养时细胞密度不可过大，避免细胞间产生接触抑制，从而大量停留在G0期；

3 在进行细胞周期检测时，需添加RNase，避免RNA对结果造成的影响。

完成以上工作后，我们就来看看CCK-8与细胞周期之间存在的变化关系，及其可能的原因：

CCK-8	细胞周期	参考原因
抑制增殖	G0/G1期增加	药物抑制DNA复制
	G2/M期增加	药物抑制有丝分裂 （如丝裂霉素等）
	S期增加	药物导致G2/M期阻滞后继续处理导致DNA断裂，部分核酸泄露
促进增殖	G0/G1期增加	细胞接种密度过大
	G2/M期增加	正常促进细胞增殖
	S期增加	正常促进细胞增殖

本期实验相关试剂

细胞周期检测试剂盒(DNA含量检测) E-CK-A351

增强型细胞活力检测试剂盒(CCK-8) E-CK-A362

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