前不久，我们发布了文章：流式课堂 | 数据对不上？细胞周期&CCK-8结果关联性分析 （点击查看）给大家讲解了CCK-8与细胞周期之间的联系，很快就有小伙伴来问了：

我的实验结果还是有问题啊，周期的结果是和CCK-8对上了，但是Annexin V凋亡结果还是和CCK-8对不明白。

别急，今天就带大家来看看Annexin V与CCK-8之间的关系。

解题思路还是一样的，要搞清楚Annexin V与CCK-8之间的关系，就要先弄清楚他们的真实检测指标：

CCK-8

Cell Counting Kit-8

CCK-8检测的是样本中的脱氢酶总活力，只要待测样本中的脱氢酶活力改变了，CCK-8检测的OD就会随之改变。同时，因为CCK-8检测结果最终反映为OD值，其他原因带来的颜色变化也可能导致OD值改变。更多CCK-8异常原因及排除方法在以前的文章中有详细介绍，有兴趣的小伙伴可以点击查看（流式课堂 | 数据对不上？细胞周期&CCK-8结果关联性分析）。

Annexin V

Annexin V检测的是样本中暴露在细胞表面的磷酯酰丝氨酸（PS）。通常情况下，与Annexin V搭配使用的核染料，能够进入到细胞膜通透性改变的细胞内部，与其中的核酸进行结合。

根据实验原理可知，只要细胞膜表面有磷酯酰丝氨酸（PS），就能和Annexin V结合；只要核染料能进入细胞内，同时细胞内有核，即可被核染料结合。据此，在分析CCK-8与Annexin V结果关联性之前，一定要先排除Annexin V检测中出现的各种异常情况：

1. 正常血小板的外表面即含有大量的磷酯酰丝氨酸（PS），因此无法用Annexin V进行血小板的凋亡检测；

2. 哺乳动物成熟的红细胞及血小板均没有细胞核，因此核染料无法与此类细胞进行结合；

3. 某些药物可能会破坏磷酯酰丝氨酸（PS）或DNA，从而导致检测试剂无法正确结合；

4. 贴壁细胞发生凋亡时，晚凋细胞会漂浮起来，未收集上清可能导致晚凋群体缺失；

5. 细胞接种密度过高，从而导致细胞被“挤死”；

6. 更多Annexin V样本制备及上机检测异常排除相关内容，请移步Annexin V凋亡实验注意事项。

解决完以上异常情况后，就可以来正式分析CCK-8与Annexin V的结果关联性了：

CCK-8	Annexin V	参考原因
抑制增值	凋亡率增加	进行细胞处理后，引起细胞凋亡，从而抑制细胞增殖，为常见情况
	凋亡率减少	进行细胞处理后，细胞生长速度减缓，或进入休眠
	凋亡率不变	1. 细胞处理强度不够，不足以引起凋亡 2. 抑制效果并非由凋亡途径引起
促进增殖	凋亡率增加	常见于炎症反应，免疫细胞快速增殖，响应炎症反应后死亡
	凋亡率减少	治疗保护类药物，可优化细胞状态，促进增殖，减少凋亡
	凋亡率不变	进行细胞处理后，增殖发生变化，但细胞状态无明显变化，属正常情况

本期流式干货分享就到这里，希望能够帮助大家更顺利的完成实验。