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生化试剂盒常见问题及解答

1. 为什么要选择Elabscience生化试剂盒?

Elabscience生化试剂盒具有独立自主的研发团队,生产的试剂盒性能卓越,操作快捷简单,并且技术服务十分专业。因此,选择Elabscience生化试剂盒,您就是选择了放心、选择了品质、选择了简单、选择了专业,对于您的实验研究是既省事儿又有质量保障!

2. 购买和使用Elabscience生化试剂盒注意事项:

1) 购买试剂盒前请弄清以下问题:

  • ① 根据取样记录,确认样品情况。主要包括样品的种类、数量和样品保存状况。
  • ② 根据实验设计或文献报道,确认测定哪些指标。测定指标最好是成系列的,这样便于得出明确结论,也好发表文章。
  • ③ 提前了解所在实验室的仪器设备情况,避免因为仪器设备不能满足,造成试剂盒购买后无法使用。


2) 购买咨询:

  • ① 客户提供检测样本对象、研究目的和测定指标,我们提供相关试剂盒的情况和所需仪器设备以及自备用品清单,确认哪些指标客户能够通过购买我们的试剂盒进行测定。
  • ② 客户提供样本情况,包括样本种类、样本数量以及样本保存状况,我们计算所需试剂盒的数量和报价,以免错购、漏购、少购或者多购。


3) 收到试剂盒后请注意以下事项:

  • ① 收到试剂盒后,检查外包装有无破损,打开试剂盒找到说明书,按照说明书中对于试剂种类和状态的描述,清点试剂种类和数量是否正常。
  • ② 按照说明书的要求,把试剂放到对应温度的冰箱或者冷藏室保存。
  • ③ 收到试剂盒后,请尽快使用。为了保证测定质量,试剂盒开封后一般应该在一个月内用完。


4) 预实验

  • ① 选择2-3个预期差异比较大的样品。
  • ② 按照说明书配制试剂,包括粉剂和自备试剂。
  • 注意:现配现用的试剂,一定要在检测前再配制,避免试剂配制之后放置时间太久!
  • ③ 严格按照说明书进行称量、匀浆、离心、取样、测定。其中,鉴定样品要进行至少两次平行测定,作为技术重复,反映客户实验操作和仪器设备的重复性好坏。
  • ④ 分析预测定结果。待预实验结果确认无误后,再开始正式测定。


5) 正式测定

  • ① 预实验结果无误后,开始正式测定!
  • ② 实验时请严格按照说明书上的操作要求进行实验!
  • ③ 实验结束后,分析检测数据。


3. 指标咨询:

客户可以先在Elabscience生化网站上搜索对应的指标,网站上能找到的,都是现有的指标,若是没有找到,可以联系销售或者技术支持确认是否有该指标,避免因为有些指标网站上的信息更新不及时,造成购买受阻。

4. 样本咨询:

1) 样本能否检测,可以参考说明书上试剂盒用途部分的内容。说明书上写到的样本类型都是可以检测的,如果说明书上没有涉及客户的样本类型,可以跟技术支持沟通,确认样本类型能否检测。若是目前没有验证过的样本类型,Elabscience可提供试剂盒试用装或售前实验。

2) 样本如何制备,可以参考说明书上的附录2样本制备,若是说明书上没有涉及请与技术支持联系。

3) 样本如何稀释,可以参考说明书上样本准备部分的内容,以及预实验的结果。

5. 生化试剂盒可以检测的样本类型有哪些?

生化试剂盒的实验原理是基于化学反应,理论上是不受生物种属及样本类型的限制。Elabscience生化试剂盒样本检测通常只分样本类型,不分种属。但是某些指标在不同种属或类型样本中的提取方式不同。因此,具体情况请参见说明书或与技术支持联系确认。

6. 说明书上写的均为新鲜样本,如果样本冻存对结果影响大吗?

1) 通常新鲜样本和冷冻样本都可用于大多数生化指标的测定,但是最好还是采用新鲜样本,因为根据指标的不同,样本的冻存对结果的影响也不同。一般情况下,随着冻存时间的延长,样本的酶活力会逐渐下降,甚至会完全失活。而某些指标中,冻存样本的检测结果会比新鲜样本检测结果高,如血氨。

2) 组织匀浆样本最好当天检测,若不能当天检测,须置于-80℃并尽快检测。(这种情况推荐客户直接冻存组织,而不是组织匀浆)。注意:样本切忌反复冻融。

7. 生化试剂盒样本检测的一般要求:

1) 于生化检测而言,样本最好无溶血、脂血、黄疸的现象。组织样本需将血液洗净擦干后再进行称重处理。

2) 样本处理后最好尽快进行检测,且保存于冰盒之上,待测。

3) 样本需澄清,若不澄清,需离心后取上清进行检测(特殊指标除外)。

4) 样本值应在试剂盒线性范围内,若超过线性范围,需稀释后再进行检测,若低于检测范围,需增加样本浓度后进行检测。

8. 血清(血浆)样本的制备

血清和血浆均是不含细胞(包括血小板)等有形成分的血液液体部分,其主要区别是血清不含凝血因子和血小板,血浆则含有凝血因子,它们的制备方法如下:

1) 血清的制备:获得的血液不能抗凝,盛于离心管或可以离心的器皿中,静置或置于37℃环境中促其凝固,待血液凝固后,将其平衡并离心(一般为1000-2000g,离心 5~10 min),得到的上清液即为血清,可小心将上清吸出(注意切勿吸出细胞成分),分装备用。

2) 血浆的制备:在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝剂(抗凝剂:血液 = 1:9,将血液加到一定量后颠倒混匀,离心(离心条件同上)后所得的上清液即为血浆。初用者最好将上清移至另一清洁容器,吸出血浆时用毛细吸管贴着液面逐渐往下吸,切忌不能吸起细胞成分。

9. 组织或细胞匀浆样本的制备

收集组织或细胞样本,加入匀浆介质后进行匀浆,有4种匀浆方式可以选择。

1) 手工匀浆:将样本(含匀浆介质)倒入玻璃匀浆管中,左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的容器中,右手将捣杆垂直插入匀浆管中,上下转动研磨数十次(6-8 min),使组织匀浆化。

2) 机械匀浆:将已称重的组织装入EP管,加入匀浆介质,用组织匀浆机,在冰水浴条件下,60 Hz,90s研磨制成组织匀浆,皮肤、肌肉组织及植物组织等可适当延长匀浆时间。

3) 超声破碎:用超声波发生器以振幅14 μm超声处理30s,在冰水浴条件下,破碎细胞;或者用超声波破碎仪,200 W,2s/次,间隙3s进行处理,总时间5min。

4) 反复冻融:适用于细胞样本,即用低渗液或双蒸水重悬细胞,再将细胞悬液进行“冷冻-融化-冷冻”循环,重复3次左右。

值得注意的是,此方法会使某些酶的活力受影响。因此,检测细胞样本的酶活力时不推荐使用此方法。

10. 细胞的收集方式

悬浮细胞可以直接离心来收集细胞沉淀,根据细胞种类选择合适的转速,一般不超过1500g,常用转速是800-1000g。

贴壁细胞的收集方式主要有2种:

1) 胰蛋白酶处理,若样本检测的是酶活力则不推荐此方法,因为胰蛋白酶会影响样本中酶活力的检测。另外,商品化的胰蛋白酶通常含有EDTA,若说明书中说明样本中不能含有EDTA,那也不能用此方法收集细胞。

2) 细胞刮收集细胞,推荐使用此方法收集细胞。

11. 常用抗凝剂的种类

1) EDTA:其机制是通过与水相中的钙离子形成稳定的螯合物而阻止血液凝固,EDTA能影响某些酶的活性,因此检测血液样本中指标的酶活时,不推荐使用此抗凝剂。

2) 肝素:是血液化学成分测定中最好的抗凝剂,其抗凝机制是与抗凝酶Ⅱ一起,在低浓度能抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之间的作用,并能加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶,从而阻止凝血酶形成;还有抑制凝血酶的自我催化及抑制因子X的作用。通常用肝素抗凝的剂量是10.0~12.5 IU/mL血液。

3) 枸橼酸盐:其抗凝机制是枸椽酸盐与血中钙离子形成可溶性螯合物,从而阻止血液凝固。

4) 草酸钾:通过草酸根与血液中的钙离子形成草酸钙沉淀,使其无凝血功能。钾、钙含量测定的血样不能用草酸钾抗凝。

12. 为什么测定管与对照管或者空白管没有差异,甚至低于对照管或空白管?

测组织和细胞样本时要先匀浆,匀浆的程度不一样释放出的蛋白也不一样,我们测蛋白就是为了校正匀浆破碎的程度。而血清血浆样本可以直接测定,无需用蛋白浓度校正。

13. 组织匀浆时有的匀浆介质是PBS,有的却是特殊的匀浆介质,用不同的匀浆介质有什么区别吗?

匀浆介质的作用是:在匀浆的过程中,提高指标的提取效率,降低指标的处理损失,保护指标的稳定性。建议尽量用说明书中的匀浆介质处理样本,不要随意更改匀浆介质。

14. 分光光度计检测法与酶标仪检测法试剂盒能否通用?

同一指标的分光光度计检测法与酶标仪检测法试剂盒不可以通用,因为两者测定体系不同,检测仪器的灵敏度也不一样。每个试剂盒都有规定适用的仪器,建议按照说明书的操作步骤进行操作,不要随意改变检测仪器。如果客户自行改变,不能保证测定质量,公司不承担实验后果,包括售后处理。

15. 分光光度计,酶标仪及生化分析仪的优缺点。

1) 分光光度计价格低廉,波长范围广(通常为全波段),但是样本使用量大,操作不便;

2) 酶标仪仪器简单、操作方便,但是灵敏度低、可供选择的波长少、难以实现自动化;

3) 生化分析仪样本使用量小,操作简单,自动化程度高,结果准确,但是仪器价格高昂。

16. 比色皿有哪些规格?

Elabscience生化试剂盒所用到的比色皿有1 cm光径石英比色皿(液体量3 mL)、0.5 cm光径石英比色皿(液体量1.5 mL)、1 mL石英比色皿(光径1 cm)、1 cm光径玻璃色皿(液体量3 mL)。需要注意的是:紫外波段(200 nm-400 nm)下不能使用玻璃比色皿进行检测。

17. 说明书上要求用0.5 cm光径的比色皿进行实验,没有0.5 cm光径的比色皿,能用1 cm光径的比色皿进行检测吗?

理论上可以检测,但实际上其样本值的准确性、灵敏度、检测范围、批间差和批内差无法保证。

18. 生化酶标板可以拆吗?可以用普通板子替代吗?

生化的板子是没有经过处理的空板子(无包被),如果一次用不完建议提前把不用的板条拆卸并放置于自封袋中,也可以用覆膜盖着,避免污染,室温放置即可。如果实验过程中板子不够用,客户可以用实验室中普通的96孔板代替。

注:荧光法和紫外的板子是不可拆卸的,不能用普通的96孔板代替。

19. 一个指标涉及到多种检测方法时,如何选择?

1) 检测原理。

2) 灵敏度及线性范围。

3) 操作简便性。

4) 试剂盒的性价比。

5) 试剂盒是否现货。

综合这5项,根据自身的需求及样本值选择合适的检测方法。

20. 如何确定所需试剂盒个数?

根据样品数量和重复次数以及试剂盒规格,计算所需试剂盒个数,试剂盒个数=样品总数×重复次数÷每个试剂盒能够测定的样本数。个别测定数据存在疑问时,往往需要再次测定,以排除疑问。另外,由于预实验设计,需要在计算的数量上再加20%左右,避免因试剂不够需再次购买试剂盒,耽误实验进程。

21. Elabscience生化试剂盒有哪些常见规格?

1) 100 Assays/50 Assays:用分光光度计检测,可以做100/50次测定。

2) 96 T/48 T:用酶标仪检测,可以做96/48次测定。

  • 以96 T/48 T的酶标仪检测试剂盒规格为例:
  • ① 48T/44样:48次测定,可以做44个样本,剩余4次测定用于空白和对照孔;
  • ② 48T/32样:48次测定,可以做32个样本,剩余16次测定用于做标曲;
  • ③ 48T/23样:48次测定,可以做23个样本(每个样本包括一个测定和一个对照孔),剩余2次测定用于空白或对照孔;
  • ④ 48T/16样:48次测定,可以做16个样本(每个样本包括一个测定和一个对照孔),剩余16次测定用于做标曲。
  • ⑤ 96T/92样:96次测定,可以做92个样本,剩余4次测定用于空白和对照孔;
  • ⑥ 96T/80样:96次测定,可以做80个样本,剩余16次测定用于做标曲;
  • ⑦ 96T/47样:96次测定,可以做47个样本(每个样本包括一个测定和一个对照孔),剩余2次测定用于空白或对照孔;
  • ⑧ 96T/40样:96次测定,可以做40个样本(每个样本包括一个测定和一个对照孔),剩余16次测定用于做标曲。
  • 注意:如果每个样品重复测定1次,那么每种规格能测定的样本数都要减半,其它规格的含义依次类推。


22. 生化试剂盒如何保存?

生化试剂盒目前一般的有效期为6个月,但也有3个月和12个月的,具体请看试剂盒上的有效期或说明书上的保质期。
生化试剂盒的保存条件并不是通用的,有的整体放在2-8℃,有的需要将组分分别保存到2-8℃及-20℃,另外,需要注意试剂的避光要求。
注意:不同批次试剂盒内各组分不能混用。

23. 按说明书中的保存方式保存试剂,出现沉淀的试剂还可以使用吗?

不一定,具体情况详见说明书中的注意事项。若说明书中未说明,可及时联系武汉伊莱瑞特生化技术支持为您答疑。

24. Elabscience生化试剂盒应该在多长时间内用完最好?

1) 在试剂盒保质期内使用都是有效的

2) 需要注意的是,出于试剂稳定性考虑,说明书上特别标明现配现用的试剂,配制后应该短时间内用完,绝对不可以过夜。

3) 实验时客户可以根据实际测定需要,进行配制适量的试剂。

注:强烈建议用户在样品提取后,准备测定前,再配制现配现用试剂,防止因为等待时间过长,导致测定结果不可靠。

25. 如何进行预实验?为什么要进行预实验?

1) 选择2~3个预期结果差异比较大的样品,严格按照说明书进行操作,注意仪器工作状态,操作规范,控制好测定条件,尤其是时间和温度。

2) 预实验的目的是:

  • ① 确定该试剂盒是否适合您的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费;
  • ② 帮助您熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒的客户;
  • ③ 确定样本的处理方法及稀释倍数是否适合该试剂盒的测定;
  • ④ 帮助您了解实验过程中可能出现的实验现象或者是问题,好及时作出调整;


26. 样本如何稀释或者浓缩?

1) 样本测定值若超出检测范围,可以将样本用生理盐水、PBS或指定的稀释液稀释后重新测定。一般稀释倍数从小到大,按照2倍,5倍,10倍,20倍…的顺序稀释,然后预实验确定一个合适的稀释倍数。

2) 样本测定值若低于检测范围,可以提高样本浓度,如称取0.2 g样本加入0.8 mL匀浆介质(1:4),10%组织匀浆相当于将样本浓缩了2倍。

27. 购买了Elabscience生化试剂盒,实验过程中可以做哪些调整?

1) 样本质量与匀浆介质(提取液)的体积比,用户可以根据预实验结果自行调整。

2) 数据的单位,用户可以根据数据大小和习惯表达方式,进行适当调整。

28. 可以改变试剂的加液顺序吗?

绝对不可以,若改变可能会造成反应不能正常进行,导致实验失败。

29. 试剂盒中所述的混匀,应该怎么混匀?

1) 分光光度计检测的试剂盒,一般用涡旋混匀仪进行混匀。

2) 酶标仪检测的试剂盒,涡旋混匀仪、96孔微板孔混匀仪、多道排枪、酶标仪振板等都可能用于混匀,具体操作见说明书的操作步骤。

30. 为什么同一样本平行测定结果差异大(复孔差异大)?

1) 样本原因:样本体系不均匀、样本提取时离心不完全、杂质等原因。

2) 仪器原因:仪器不稳定造成系统误差大,一般仪器需要预热30分钟后再进行比色检测。

3) 操作原因:由于操作不熟练,加样和加液手法问题,造成平行结果差异大。

31. 要不要做标曲?试剂盒中有要求需要做标曲的,能否不做标曲直接采用说明书上的?不会做标曲,标曲不过原点怎么办?

1) Elabscience生化试剂盒一般用酶标仪检测的盒子大多数都是要客户自己做标曲的。怎么判断要不要做标曲,可以看说明书上的酶标版设置或者操作表部分。客户不可以自己不做标曲就直接用说明书上的标曲计算样本值,因为实验室的环境、仪器设备、实验人员、操作手法都不一样。

2) 不会做标曲,可以直接联系公司技术人员寻求帮助。所做的标曲跟说明书上的不太一样,标曲不过原点,主要是在做标曲时,没有用浓度与绝对OD值作图导致的。绝对OD值是用不同浓度标准品的OD值减去浓度为0的标准品OD值。

32. 测定管与对照管或者空白管为什么会没有差异,甚至低于对照管或空白管?

1) 如果空白值偏高,可能是空白管存在一定的污染。

2) 样本原因导致测定与对照或空白结果几乎没有差异:

  • ① 样本本身的指标含量偏低导致的,可以考虑适当增加样本量或者提高样本浓度;
  • ② 样本提取是否正确和充分,提取步骤是否按照说明书操作步骤进行。如果样本提取不充分或者未按说明书要求操作,也可能会导致结果偏低的情况。
  • ③ 样品保存不当导致的。需要客户自己仔细检查样本处理、保存以及制备状况。


3) 反应体系中存在颗粒或者气泡。随着时间延长,颗粒沉淀或者气泡破裂,会导致吸光度显著下降,出现负值。颗粒通常来源于样本提取液,可以进行再次离心,确保得到澄清的上清液;当然也可能来自试剂,测定前观察试剂中是否有沉淀,如果有,待充分溶解后再小心吸取上清液。气泡通常来源于实验操作或反应本身,可以通过提高实验操作的精确性,降低反应速度来防止气泡的产生。

4) 试剂盒质量问题。可以换一种确定含有该指标的完全不同的样本来验证。如果同样没有活性,那表明试剂盒质量问题的可能性很大。请客户立即联系公司技术人员。

33. 标准品或者样本为什么不显色?

1) 样本中确实不含有该指标或者指标含量太低导致的。

2) 前处理不当:例如测定酶活,使用了导致酶失活的化学试剂等。

3) 样本保存不当或提取方法不当等。

4) 试剂保存不当,包括保存温度、放置太久过期了等,导致试剂盒中某些试剂失效。

34. 数据变化趋势不符合预期?

通常客户在实验前,会根据参考文献或此前实验室的相关测定结果,对实验结果有一个预估变化趋势。但是,实际测定的数据变化有时却并不符合预期。

  • ① 先查找实验技术问题,以及计算公式和单位有没有问题;
  • ② 再找样本质量有没有问题;
  • ③ 若两者都没有问题,我们就要思考实验方案,有时不符合预期的结果反而意味着研究的新意,甚至是新发现。
  • ④ 如果选择了测定系列指标,就可以通过相关指标的变化趋势是否一致,来判断该指标的变化是否正常,因为同时几个相关指标变化都不正常的可能性比较小。


35. 为什么检测数据与文献报道或者实验室此前测定数据结果差异大?

1) 样品本身的影响:同一指标在不同样品,同一样品不同发育阶段或者不同环境下,其浓度或酶活会发生非常大的变化。

2) 测定方法的影响:同一指标因为测定方法不同,检测结果会出现较大的差异,与文献对比时,应注意文献的检测方法、培养和处理条件及计算公式、单位、单位的定义等。

3) 操作和仪器设备的影响:操作者取样习惯、匀浆程度和外部检测环境等都会对检测结果有很大影响。不同仪器设备的检测限和稳定性也会有一定影响。

4) 与其他文献检测结果比较时,应比较实验组与对照组的数据差异性和变化趋势,而不是检测结果的数值。


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