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如何明智选择抗体?

如何明智选择抗体?

2017-09-04作者:admin赞:362

        检测任何目的靶蛋白都有多种抗体可供选择,为缩小抗体的选择范围,选中合适的抗体,需要考虑如下几种因素:

1)    参考文献

2)    抗原表位

3)    抗体的应用范围

4)    抗体和样本的种属

5)    单抗和多抗的选择


1.     参考文献

        通过查阅文献,核查其他研究人员在研究你的兴趣靶蛋白时用过哪些抗体,如果这些抗体应用范围与你的实验应用一致,可优先选择这些抗体。

2.     抗原表位

        如果你研究的是靶蛋白的某一特定区域,如某一特定的磷酸化位点,可核实抗体免疫原信息,选择免疫原与你研究的目的区域一致的抗体。

3.     抗体的应用范围      

        一般抗体的说明书都会列出该抗体经验证适用于何种实验的类型(如:WBIHCIPIF),如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种实验验证,尽量根据说明书列出的已验证的类型来选择适合你实验的抗体。

4.     抗体和样本的种属

        确定实验样本的种属来源,如HumanMouseRat等。一般抗体说明书都会列出该抗体适用于何种物种实验,请根据抗体说明书列出的已验证的种属来选择适合你实验的抗体。

5.     单抗和多抗的选择

        一般单克隆抗体识别单一的抗原表位,其特异性强,但亲和力相对小、检测抗原灵敏度相对较低;而多克隆抗体识别的是靶蛋白上的多个抗原表位,特异性稍弱,有时会与其它蛋白发生交叉反应,但抗体的亲和力强、灵敏度高。在流式细胞术实验中,单抗效果会更好,因为多抗识别过多的抗原表位将会导致数据不准确。IP实验中,多抗却能得到令人满意的实验结果。

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