• 本公司产品仅供体外研究使用,不用于临床诊断

当前位置: 首页>>资源中心 >>产品选购指南 >>抗体选购指南 >>

流式实验中同型对照的选择方法

流式实验中同型对照的选择方法

2017-09-06作者:admin赞:2

抗体有时会因为非特异的蛋白与蛋白的相互作用而结合细胞内某些成分、因为疏水作用结合脂肪,也可能会结合一些细胞表面的抗体受体。比如说,IgG亚型的抗体会结合细胞表面的Fc受体,如CD16CD32CD64等。理想条件下,各种类型的非特异性结合都可以通过蛋白(BSA、牛奶或动物血清)来阻断。Fc受体的结合则可以通过与含免疫球蛋白的血清预孵育来阻断。所以一个抗体非特异性相互作用及与Fc受体结合的情况,都可以用无关抗原的相同亚型抗体来比照,即同型对照。那么在做流式实验时如何选择同型对照呢?


一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体。比如抗人的CD56FITC标记的抗体,抗体来源是Mouse IgG1,κ链,那么它的同型对照就应该是FITC标记的Mouse IgG1,κ链。


如果抗体是组合形式,如纯化的一抗+荧光标记的二抗,那么应该选择一抗的同型对照。比如CD86的纯化抗体,成分是Mouse IgG1,κ链,它的同型对照是纯化的Mouse IgG1,κ链,如果实验用到的二抗是PE标记的抗小鼠IgG1。那么染色方式如下-------样本管纯化的CD86PE标记的抗小鼠IgG1(二抗)+样本,同型对照管纯化的同型对照(Mouse IgG1,κ链)+PE标记的抗小鼠IgG1(二抗 )+样本。


如果没有找到完全匹配的同型对照,在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下,优先选择的顺序应该是亚链不同--亚型不同。比如,某种的抗体的来源是Mouse IgG2а,κ链。如果找不到完全相同的同型对照,那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2а;如果也找不到合适荧光素标记的Mouse IgG2а,那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2b;如果还是没有找到Mouse IgG2b,那么可以选择相同荧光标记的Mouse IgG2作为同型对照。