缓冲液配制指南
Source: Elabscience®Published: 2017-09-01
Buffer配方
1.0 mol/L TrisHCl（pH 6.8）
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Tris |
30.28 g |
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超纯水 |
200 mL |
溶解后，用浓盐酸调pH至6.8，最后用超纯水定容至250 mL，高温灭菌后室温下保存。
1.5mol/L TrisHCl（pH 8.8）
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Tris |
45.43 g |
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超纯水 |
200 mL |
溶解后，用浓盐酸调pH至8.8，最后用超纯水定容至250mL，高温灭菌后室温下保存。
10% SDS
取SDS 10g，加蒸馏水至100 mL， 50 ℃水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。
10% 过硫酸胺（APS）
取过硫酸胺 0.1 g ，加超纯水1.0 mL 溶解后，4 ℃保存，保存时间为1周。（-20 ℃长期保存）
30% 丙烯酰胺
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丙烯酰胺 |
29 g |
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N，N’-亚甲双丙烯酰胺 |
1gspan> |
溶于总体积为50 mL的水中，定容至100 mL。室温保存于棕色瓶。
10× PBS（2L）
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NaCl |
160 g |
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KCl |
4 g |
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Na2HPO4·12H2O |
22.9 g |
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KH2PO4 |
4 g |
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dH20 |
1 L |
NaOH调pH值至7.4，定容至2 L。保存于室温。
还原型5×SDS上样缓冲液
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0.5 mol/L TrisHCl（pH6.8） |
2.5 mL |
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二硫苏糖醇（DTT） |
0.39 g |
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SDS |
0.5 g |
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溴酚蓝 |
0.025 g |
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甘油 |
2.5 mL |
混匀后，分装于1.5 mL离心管中，4 ℃可保存数周，-20 ℃可长期保存。
电泳液缓冲液
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Tris |
3.03 g |
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甘氨酸 |
18.77 g |
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SDS |
1 g |
加蒸馏水溶解定容至1000 mL室温保存，1次溶液可重复使用3～5 次。
转移缓冲液
1X电转液：
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甘氨酸 |
11.25 g |
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Tris |
2.375 g |
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SDS |
0.375 g |
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甲醇 |
200 mL |
加蒸馏水溶解定容至1000 mL 溶解后4 ℃保存，1次溶液可重复使用3～5次。
TBS缓冲液
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NaCl |
8.5 g |
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Tirs |
1.2 g |
加蒸馏水溶解，冰醋酸调pH至7.2，定容至1000 mL。室温保存。
洗脱液TBST溶液
TBS溶液1000 mL ，1 mL吐温20，混匀后即可使用，最好现用现配。
封闭液（含5%脱脂奶粉的TBST缓冲液）
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脱脂奶粉 |
5 g |
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TBST |
100 mL |
溶解后使用，一次性使用。
RIPA（中）裂解液
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试剂 |
用量 |
终浓度 |
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Tris-base |
0.6055 g |
50 mM |
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NaCl |
0.8766 g |
150 mM |
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EDTA·2Na.2H2O |
0.037224 g |
1 mM |
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SDS |
0.1 g |
0.1% |
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脱氧胆酸钠 |
0.5 g |
0.5% |
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NP-40 |
1 mL |
1% |
Tris-base、NaCl、EDTA、SDS称量后用蒸馏水溶解，浓HCl调pH值至7.4，先配置10%脱氧胆酸钠，加入5 mL即为0.5%，再加入1 mL的NP-40，混匀后定容至100 mL，分装，-20℃保存。
