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Elabscience抗体试剂(免疫组织化学)使用方法 (Roche Benchmark XT )

Source: Elabscience®Published: 2024-10-17

一、目的:

本方法可指导使用者在Benchmark XT (Roche)正确使用Elabscience®的抗体试剂(免疫组织化学)进行免疫组织化学操作,并获得最优结果。

二、范围:

本方法适用于使用Elabscience®的抗体试剂(免疫组织化学)作为一抗在Benchmark XT (Roche)仪器上进行的全自动免疫组化染色实验。

三、程序:

1.试剂与耗材

1.1环保透明脱蜡液;

1.2脱脂奶粉;

1.3无水乙醇;

1.4 95%乙醇;

1.5 10× EZ PREP SOLUTION 货号:05279771001,Roche;

1.6 Reaction Buffer Concentrate (10×) 货号:05353955001,Roche;

1.7 LCS (Predilute) 货号:05264839001,Roche;

1.8 10× SSC SOLUTION 货号:05353947001,Roche;

1.9 CELL CONDITIONING SOLUTION, CC1 (pH 8.4) 货号:05279801001,Roche;

1.10 UltraView Universal DAB Detection Kit 货号:05269806001,Roche;

1.11 返蓝液:BLUING REAGENT 货号:05266769001,Roche;

1.12 苏木素:HEMATOXYLIN II 货号:05277965001,Roche;

1.13 KIT PACK, EBAR(US/EUROPE) 货号:05248850001,Roche;

1.14 RIBBON, EBARPRINTER 货号:05250889001,Roche;

1.15 中性树胶。

2.仪器设备

2.1全自动免疫组化染色系统:Benchmark XT, Roche。

3.实验操作

3.1.烤片:

3.1.1选择需检验的组织切片类型和数量,在切片上进行相应标记;

3.1.2将切片插入染色架中放入烘箱(温度设定62°C)加热烤片30 min60 min。

3.2.标签打印:

3.2.1点击“Barcode Label”编写标签信息并打印标签,在对应的组织切片上贴好标签。

3.3 .10%脱脂奶粉溶液浸泡玻片:

3.3.1在200 ml蒸馏水中加入20 g脱脂奶粉,并搅拌均匀,即10%脱脂奶粉溶液(也可使用全脂奶粉配制10%的溶液)

3.3.2把贴好标签的玻片完全浸入10%脱脂奶粉溶液中浸泡15 min,防止组织脱片;

3.3.3浸泡好的玻片在自来水中进行清洗,需要清洗掉玻片上大部分的10% 脱脂奶粉溶液,玻片上需残留少量的10%脱脂奶粉溶液(不可把玻片上的10%脱脂奶粉溶液完全清洗干净),等待上机染色。

3.4 . Benchmark XT 染色程序:

3.4.1将玻片置于切片盘上,擦干切片背面和标签上的水分,确保每张切片放稳,均处于切片盘的四个卡扣内。

3.4.2将DAB试剂盒、苏木素、返蓝液等试剂放入试剂架(请确保相应的试剂足够),并检查加样口是否充满液体。如发现没有充满液体,请挤压试剂瓶,排去空气,让液体充满加样口并形成半月形液面。

3.4.3通过Ventana NexES软件设定Protocol,点击RUN完成运行前确认信息并输入切片数量。点击START RUN,系统首先进行自检,自检完成后,程序开始运行。

3.4.4免疫组化染色程序如下:

3.4.4.1 Paraffin [Selected];

3.4.4.2 Deparaffinization [Selected];

3.4.4.3 Cell Conditioning [Selected];

3.4.4.4 Conditioner #1 [Selected];

3.4.4.5 Mild CC1 95Deg C and Incubate for 30 min [Selected];

(抗原修复结束后,仪器会提示抽出载玻片台,加一抗试剂,一抗试剂加完之后,将载玻片台推进仪器,手动按仪器上的提示键,即可进入后续染色程序);

3.4.4.6 Ab Incubation Temperatures [Selected];

3.4.4.7 Disable Heat for Ab Inc. [Selected];

3.4.4.8 Titration [Selected];

3.4.4.9 Hand Apply (Primary Antibody), and Incubate for 32 min;

3.4.4.10  Counterstain [Selected];

3.4.4.11  Apply One Drop of [HEMATOXYLIN II] (Counterstain), Apply Coverslip, and Incubate for 12 min;

3.4.4.12  Post Counterstain [Selected];

3.4.4.13  Apply One Drop of [BLUING REAGENT] (Post Counterstain), Apply overslip, and Incubate for 4 min;

3.4.5仪器染色结束后,抽出载玻片台,取出玻片并放入含有洗洁精的自来水中清洗,确保洗净每一张玻片上的油脂,再用流水冲洗玻片,直至洗净,甩干玻片上残留的水,进入后续的处理。

3.5.脱水透明:

3.5.1 75%的乙醇中浸泡脱水30 s/次,共2次;

3.5.2 95%的乙醇中浸泡脱水30 s/次,共2次;

3.5.3无水乙醇中浸泡脱水30 s/次,共2次;

3.5.4环保透明脱蜡液中浸泡透明5 min。

注:每次换缸时都需沥干(约5 s),再放入下一缸。

3.6.封片:

3.6.1取出切片沥干(约5 s),用吹风机冷风吹干切片;

3.6.2滴加12滴中性树胶于切片组织上(视切片组织数量和大小而定),盖上盖玻片;

3.6.3检查切片,确保切片组织完全被中性树胶覆盖住,且组织中没有较大气泡(若有较大气泡,通过挤压盖玻片排出);

3.6.4将切片放置于通风橱中晾干。

4.镜下观察切片,判定结果。

四、注意事项:

1.本方法适用于使用Elabscience®抗体试剂(免疫组织化学)在全自动免疫组化染色系统Benchmark XT上进行免疫组化染色操作使用,由于不同品种/靶标的Elabscience®抗体所要求的抗原修复方式可能存在不同程度的差异,使用者需在使用前仔细阅读说明书并严格按照说明书指导进行使用。

2.本方法对免疫组化实验过程中的重要相关试剂作了品种/型号/厂家的推荐,使用者如需更换相应试剂/原料,需对替代品种进行等效性的评价并寻求最优的操作程序。

3.本方法适用于使用Elabscience®抗体试剂(免疫组织化学)在全自动免疫组化染色系统Benchmark XT上进行免疫组化染色操作使用,如使用者更换免疫组化染色系统,需要对替代系统进行等效性的评价并寻求最优的操作程序。


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