Elabscience抗体试剂(免疫组织化学)使用方法 (Roche Benchmark XT )
Source: Elabscience®Published: 2024-10-17
一、目的:
本方法可指导使用者在Benchmark XT (Roche)正确使用Elabscience®的抗体试剂(免疫组织化学)进行免疫组织化学操作,并获得最优结果。
二、范围:
本方法适用于使用Elabscience®的抗体试剂(免疫组织化学)作为一抗在Benchmark XT (Roche)仪器上进行的全自动免疫组化染色实验。
三、程序:
1.试剂与耗材
1.1环保透明脱蜡液;
1.2脱脂奶粉;
1.3无水乙醇;
1.4 95%乙醇;
1.5 10× EZ PREP SOLUTION 货号:05279771001,Roche;
1.6 Reaction Buffer Concentrate (10×) 货号:05353955001,Roche;
1.7 LCS (Predilute) 货号:05264839001,Roche;
1.8 10× SSC SOLUTION 货号:05353947001,Roche;
1.9 CELL CONDITIONING SOLUTION, CC1 (pH 8.4) 货号:05279801001,Roche;
1.10 UltraView Universal DAB Detection Kit 货号:05269806001,Roche;
1.11 返蓝液:BLUING REAGENT 货号:05266769001,Roche;
1.12 苏木素:HEMATOXYLIN II 货号:05277965001,Roche;
1.13 KIT PACK, EBAR(US/EUROPE) 货号:05248850001,Roche;
1.14 RIBBON, EBARPRINTER 货号:05250889001,Roche;
1.15 中性树胶。
2.仪器设备
2.1全自动免疫组化染色系统:Benchmark XT, Roche。
3.实验操作
3.1.烤片:
3.1.1选择需检验的组织切片类型和数量,在切片上进行相应标记;
3.1.2将切片插入染色架中放入烘箱(温度设定62°C)加热烤片30 min60 min。
3.2.标签打印:
3.2.1点击“Barcode Label”编写标签信息并打印标签,在对应的组织切片上贴好标签。
3.3 .10%脱脂奶粉溶液浸泡玻片:
3.3.1在200 ml蒸馏水中加入20 g脱脂奶粉,并搅拌均匀,即10%脱脂奶粉溶液(也可使用全脂奶粉配制10%的溶液)
3.3.2把贴好标签的玻片完全浸入10%脱脂奶粉溶液中浸泡15 min,防止组织脱片;
3.3.3浸泡好的玻片在自来水中进行清洗,需要清洗掉玻片上大部分的10% 脱脂奶粉溶液,玻片上需残留少量的10%脱脂奶粉溶液(不可把玻片上的10%脱脂奶粉溶液完全清洗干净),等待上机染色。
3.4 . Benchmark XT 染色程序:
3.4.1将玻片置于切片盘上,擦干切片背面和标签上的水分,确保每张切片放稳,均处于切片盘的四个卡扣内。
3.4.2将DAB试剂盒、苏木素、返蓝液等试剂放入试剂架(请确保相应的试剂足够),并检查加样口是否充满液体。如发现没有充满液体,请挤压试剂瓶,排去空气,让液体充满加样口并形成半月形液面。
3.4.3通过Ventana NexES软件设定Protocol,点击RUN完成运行前确认信息并输入切片数量。点击START RUN,系统首先进行自检,自检完成后,程序开始运行。
3.4.4免疫组化染色程序如下:
3.4.4.1 Paraffin [Selected];
3.4.4.2 Deparaffinization [Selected];
3.4.4.3 Cell Conditioning [Selected];
3.4.4.4 Conditioner #1 [Selected];
3.4.4.5 Mild CC1 95Deg C and Incubate for 30 min [Selected];
(抗原修复结束后,仪器会提示抽出载玻片台,加一抗试剂,一抗试剂加完之后,将载玻片台推进仪器,手动按仪器上的提示键,即可进入后续染色程序);
3.4.4.6 Ab Incubation Temperatures [Selected];
3.4.4.7 Disable Heat for Ab Inc. [Selected];
3.4.4.8 Titration [Selected];
3.4.4.9 Hand Apply (Primary Antibody), and Incubate for 32 min;
3.4.4.10 Counterstain [Selected];
3.4.4.11 Apply One Drop of [HEMATOXYLIN II] (Counterstain), Apply Coverslip, and Incubate for 12 min;
3.4.4.12 Post Counterstain [Selected];
3.4.4.13 Apply One Drop of [BLUING REAGENT] (Post Counterstain), Apply overslip, and Incubate for 4 min;
3.4.5仪器染色结束后,抽出载玻片台,取出玻片并放入含有洗洁精的自来水中清洗,确保洗净每一张玻片上的油脂,再用流水冲洗玻片,直至洗净,甩干玻片上残留的水,进入后续的处理。
3.5.脱水透明:
3.5.1 75%的乙醇中浸泡脱水30 s/次,共2次;
3.5.2 95%的乙醇中浸泡脱水30 s/次,共2次;
3.5.3无水乙醇中浸泡脱水30 s/次,共2次;
3.5.4环保透明脱蜡液中浸泡透明5 min。
注:每次换缸时都需沥干(约5 s),再放入下一缸。
3.6.封片:
3.6.1取出切片沥干(约5 s),用吹风机冷风吹干切片;
3.6.2滴加12滴中性树胶于切片组织上(视切片组织数量和大小而定),盖上盖玻片;
3.6.3检查切片,确保切片组织完全被中性树胶覆盖住,且组织中没有较大气泡(若有较大气泡,通过挤压盖玻片排出);
3.6.4将切片放置于通风橱中晾干。
4.镜下观察切片,判定结果。
四、注意事项:
1.本方法适用于使用Elabscience®抗体试剂(免疫组织化学)在全自动免疫组化染色系统Benchmark XT上进行免疫组化染色操作使用,由于不同品种/靶标的Elabscience®抗体所要求的抗原修复方式可能存在不同程度的差异,使用者需在使用前仔细阅读说明书并严格按照说明书指导进行使用。
2.本方法对免疫组化实验过程中的重要相关试剂作了品种/型号/厂家的推荐,使用者如需更换相应试剂/原料,需对替代品种进行等效性的评价并寻求最优的操作程序。
3.本方法适用于使用Elabscience®抗体试剂(免疫组织化学)在全自动免疫组化染色系统Benchmark XT上进行免疫组化染色操作使用,如使用者更换免疫组化染色系统,需要对替代系统进行等效性的评价并寻求最优的操作程序。