细胞带有GFP荧光时，如何进行流式凋亡分析？

随着生物研究进入基因时代，转染技术的应用越来越广泛。在此过程中，通常会引入GFP（绿色荧光蛋白）标签，去验证转染是否成功。

在之前的流式课堂中，我们曾多次提到过流式配色问题。今天，就来带大家看看，带有GFP标签的细胞，在流式凋亡检测中，应该如何配色和分析结果。

一、如何选择试剂盒

挑选试剂盒时，需要选择干扰少的荧光组合。GFP的激发/发射波长为488/510，通常在流式细胞仪中的检测通道为FL1。因此，我们不能选择荧光标签为FL1检测通道的凋亡检测试剂盒，如AF488、FITC、EGFP等。

在这里，比较推荐的荧光组合是Annexin-V APC/7AAD。APC的激发/发射波长为650/660，7AAD的激发/发射波长为546/650，可以很好地降低GFP带来的干扰，使结果分析更加准确。

二、如何分析结果

在选择了合适的试剂盒进行上机检测后，恰当的结果分析，对于数据的完美呈现，也是至关重要的。以前文数据为例，我们来看看如何分析：

01 设置FSC/SSC圈门

根据大小及颗粒度，圈出需要分析的细胞群体，排除碎片及黏连体的影响；

02 调整荧光补偿

通过荧光波谱图，可以看出Annexin-V APC/7AAD组合与GFP波谱的重叠区域很小，但仍存在部分重叠。为了使结果更加准确，需要进行荧光补偿调节；

                             调节补偿前                                                                调节补偿后

03 划定十字门，得到最终凋亡结果

经过以上步骤，从图中可以看出，最终的实验结果是较为理想的。

最后总结一下，带有GFP荧光的细胞进行流式凋亡检测的注意事项：

1.  选择荧光干扰少的检测试剂盒；

2.  合理的圈门；

3.  正确调整荧光补偿。

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