ELISA常见问题
Source: Elabscience®Published: 2017-08-31
问题描述 |
可能原因 |
相应对策 |
精确度低 |
洗涤不完全 |
保证洗板机正常运行 保证充足的浸泡时间 |
拍板不完全 |
充分拍板至孔内无明显残留液体 |
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试剂混合不充分 |
保证溶液充分混合 |
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溶液被污染 |
重新配制溶液 |
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标准品稀释不正确 |
稀释液作为空白值;保证用最高浓度标准品精确稀释 保证按正确倍比梯度稀释 |
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标准曲线梯度差 |
洗涤不完全 |
保证洗板机正常运行 |
拍板不完全 |
充分拍板至孔内无残留液体 |
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每孔加液体积不等 |
检查移液器 必要时重新校准移液器 |
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加液错误 |
检查加液情况 |
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边缘效应 |
孔间温度不均 |
使用推荐的孵育时间和温度;控制加液间隔时间 |
封板覆膜封板不完全造成的溶液蒸发 |
保证正确使用封板覆膜 |
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实验中断 |
实验必须连续完成 标准品和样本需在实验前准备好 |
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背景值高 |
使用前试剂未平衡至室温 |
使用前试剂平衡至室温(18-25℃) |
洗涤不完全 |
保证洗板机正常运行 保证充足的浸泡时间 |
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拍板不完全 |
充分拍板至孔内无明显残留液体 |
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能建立标准曲线,但梯度差不明显 |
标准曲线稀释浓度计算不当 |
检查计算结果并重新建立标准曲线 |
洗涤不充分 |
保证充分洗涤 |
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封板覆膜重复使用 |
每一步使用新的封板覆膜 |
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没有使用封板覆膜 |
使用封板覆膜 |
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溶液被污染 |
重新配制溶液 |
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洗涤不完全 |
保证充分洗涤 如果使用自动洗板机,请检查所有出口是否干净且无堵塞 |
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孵育温度变化 |
使用推荐的孵育仪器和温度 避免将酶标板放置于变化的温度环境 |
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重复性差 |
封板覆膜重复使用 |
每一步使用新的封板覆膜 |
加液不正确 |
检查加液情况 |
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读数数值过低或无信号 |
溶液被污染 |
重新配制溶液 |
酶标仪波长设置错误 |
检查酶标仪 |
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未加终止液 |
每孔加入终止液 |
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孵育时间不充分 |
增加孵育时间 |
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孵育温度不稳定 |
检查恒温箱 |
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检测抗体或HRP酶稀释不正确或步骤颠倒 |
按说明书操作 |
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试剂盒失活 |
使用新的试剂盒 |
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试剂混合不充分 |
保证溶液充分混合 |
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HRP酶结合物不足 |
保证正确稀释 |