ELISA实验FAQs之实验结果OD值偏高
Source: Elabscience®Published: 2022-09-15
在往期文章中《ELISA实验FAQs之实验结果OD值偏低》,已经帮大家汇总了ELISA实验结果OD值偏低的问题分析和解决方案,相信大家一定收获满满。
除了上述问题,大家对ELISA实验结果OD值偏高的问题是否存在困惑呢?不要慌!咱们这就将ELISA实验结果OD值偏高的原因和对策一一道来,助力大家顺利完成实验数据分析。
整体OD值偏高
可能原因 |
相应对策 |
a. 试剂盒组分被污染 |
使用新的试剂盒,按照说明书要求保存试剂盒 |
b. 试剂配制不正确 |
按照试剂盒说明书步骤,配制相应的试剂溶液 |
c. 吸液或加液不正确 |
检测移液器和吸头,使用校准好的移液器和正确的移液方法 |
d. 混用其他试剂盒试剂 |
保证使用试剂盒内完整的一套试剂进行实验,不同品牌及不同批次间的试剂可能存在不匹配现象 |
e. 洗涤次数不够 |
按照说明书的洗涤次数进行操作 |
f. 孵育温度不正确 |
按照说明书提供的孵育温度进行孵育 |
g. 孵育时未覆膜,导致溶液挥发污染 |
加封口膜,或者加盖进行孵育 |
h. 显色时间过长 |
根据实际显色情况酌情缩短或延长,一般为15分钟左右,但不可超过30分钟 |
i. 酶标仪设置错误 |
在酶标仪上检查波长和滤光片设置 |
标曲OD值正常,样本OD值过高
可能原因 |
相应对策 |
a. 样本浓度过高 |
稀释样本,查找文献/咨询技术支持后,通过预实验确定样本的最佳稀释倍数 |
b. 样本处理或保存不当 (含干扰显色的内源性成分) |
确保正确采集与保存样本,避免反复冻融 |
c. 基质效应 |
稀释样本可以降低基质效应 |
标准品/样本复孔差异大
可能原因 |
相应对策 |
a. 加样量孔间不一致 |
检测加样情况,使用校准好的移液器和正确的移液方法 |
b. 加样时,加在孔壁上部非包被区 |
加样枪头不要贴壁和触底 |
c. 混用其他试剂盒试剂 |
保证使用试剂盒内完整的一套试剂进行实验,不同品牌及不同批次间的试剂可能存在不匹配现象 |
d. 样品或试剂混合不充分 |
保证样品和试剂充分混匀 |
e. 洗板不彻底 |
按照说明书规定,进行洗板操作 |
f. 加入底物溶液和终止液体的顺序不一致 |
确保所有加液步骤顺序的一致性 |
g. 酶标板孔溶液存在气泡 |
加液时应规范操作,避免产生气泡,确保读取酶标板前不存在气泡 |
h. 试剂盒组分未平衡 |
确保酶标板和每个组分均平衡至室温后,再进行实验 |
i. 样本保存不当 |
确保正确采集与保存样本,避免反复冻融 |
j. 终止不充分 |
终止后的溶液,需要在完成振板操作后,再进行读数 |
空白背景值高
可能原因 |
相应对策 |
a. 试剂盒组分失活 |
使用新的试剂盒,按照说明书要求保存试剂盒 |
b. 试剂盒组分未平衡 |
试剂盒每个组分都需要平衡至室温后进行实验 |
c. 混用其他试剂盒试剂 |
保证使用试剂盒内完整的一套试剂进行实验,不同品牌及不同批次间的试剂可能存在不匹配现象 |
d. 洗液被污染 |
配制新的洗液 |
e. 检测抗体/酶结合物工作液浓度过高 |
使用说明书中推荐的稀释倍数 |
f. 酶标板洗涤不充分 |
保证每步洗涤完全,洗板时使用试剂盒配备的洗涤液,防止交叉污染 |
g. 酶标板拍板不完全 |
充分拍板至孔内无明显残留液体 |
h. 孵育温度过高 |
检查恒温箱,确保孵育温度稳定在37℃ |
i. 孵育时间过长 |
按照说明书的反应时间进行孵育 |
以上,是分享给大家的常见ELISA实验结果OD值偏高的原因及对策。更多ELISA实验相关问题,可咨询网站右侧的在线客服~
Elabscience® · ELISA试剂盒特点
产品数量多:1300+ELISA试剂盒,涉及10多个研究领域
种属范围广:包含人、小鼠、大鼠、兔、猴、猪等
规格种类多:48T/96T/96T*5
套装完整性:包含实验所需整套试剂,方便使用
高精密度:批内、批间CV<10%
良好回收率:80%~120%
高灵敏度:pg级
高特异性:交叉反应率<10%
文献支持:SCI文献引用8000+篇
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