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检测实验样本中的靶蛋白,ELISA、WB、IHC应该选哪个?

Source: Elabscience®Published: 2022-09-26

酶联免疫吸附测定(ELISA)、蛋白免疫印迹(WB)、免疫组化(IHC)是免疫学三大常用工具,应用于目的蛋白的定量、定性和定位分析。

这三种免疫学检测手段,都是基于抗原与抗体特异性结合的原理,其差异性在于:

ELISA更适合定量检测胞外的分泌性蛋白

WB多用于胞膜、胞浆或胞核蛋白的半定量检测

IHC主要用于胞蛋白的定位

在实验技术方面,Elabscience®已有13年钻研经验。为了帮助初学者快速上手,减少摸索苦恼,为大家准备了一套标准的实验流程和技巧,具体如下:

酶联免疫吸附测定(ELISA)

ELISA运用了免疫学原理和化学反应显色原理,需要将抗原或抗体预包被在固相载体表面,使后来形成的抗原-抗体-酶(荧光基团)-底物复合物黏附在载体上,通过检测OD值或发光值,来检测靶蛋白的含量。ELISA更适合定量检测胞外的分泌性蛋白。

⊙实验流程:

双抗体夹心法操作步骤图

双抗体夹心法操作步骤图

⊙操作视频:


蛋白免疫印迹(WB)

WB(Western Blot,蛋白免疫印迹)利用靶蛋白分子量大小不同的原理,用SDS-PAGE(凝胶电泳)分离蛋白质,将分离开的蛋白质用电转仪转移到固相载体(膜)上,然后利用抗原-抗体-标记物显色来检测目标蛋白含量。WB多用于胞膜、胞浆或胞核蛋白的定性和半定量检测。

⊙实验流程:

WB实验操作步骤图

WB实验操作步骤图

⊙操作视频:


免疫组化(IHC)

IHC(Immunohistochemistry,免疫组织化学技术)融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等),通过化学反应,使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色,来对组织(细胞)内抗原进行定位、定性及定量的研究,其主要对胞内蛋白进行定位。


⊙实验流程:

IHC实验操作步骤图

IHC实验操作步骤图

⊙操作视频:

以上是Elabscience®分享给大家的关于ELISA、WB和IHC实验的操作流程与操作视频~有任何相关问题,可联系网站右侧在线客服~



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