小鼠淋巴结单细胞悬液制备及注意事项
Source: Elabscience®Published: 2022-06-07
小鼠淋巴结单细胞悬液制备流程
1. 将小鼠颈椎脱臼处死,75%酒精浸泡5 min,取出小鼠,腹部朝上置于无菌操作台上。
2. 用剪子从胸骨起沿正中线一直到颌下将皮肤剪开,再从颌下向左右耳根的方向切开皮肤。用镊子夹着皮肤向左右掀开并用针固定,即可见到胸骨上方的一对体积较大的颌下腺。在左右颌下腺各自的上缘,附着有黄色的颈前部淋巴结。剪断胸锁乳突肌和肌腹,并掀起它们两个断端,可见到左颌下腺背侧深部左、右各有一个小的颈深部淋巴结。用镊子和眼科小剪仔细将淋巴结摘除。
3. 取出淋巴结,并浸泡于干净的PBS溶液中。
4. 用无菌的2.5 mL注射器吸取培养液,左手用镊子夹持淋巴结,右手持注射器,小心插入淋巴结中吹打,至淋巴结细胞完全被吹打干净,观察只剩余白色的结缔组织和脂肪组织为止。
5. 将吹打出来的淋巴结细胞用200目筛网过滤,收集于15 mL离心管,300 g离心5 min,弃上清。
6. 用细胞染色缓冲液重悬淋巴结细胞,计数,并调整细胞浓度至1×107/mL。
小鼠淋巴结细胞FSC/SSC图
注意事项:
1. 颈部淋巴结
颈浅部淋巴结位于左右颌下腺之浅表和外侧,常为脂肪组织所包绕,呈卵圆形。颈深部淋巴结位于左右胸乳突肌和锁乳突肌腹侧的深处,舌骨下方肌肉群的外侧,即颌下腹背深处,略近扁珠形。摘除时,如急性实验可先行穿刺股动脉,颈动脉切断放血,避免手术时出血难以观察淋巴结位置。
2. 腋窝淋巴结
位于左右腋窝脂肪组织之内。呈梨形,沿胸骨剪断胸部肌肉,掀向外上方,剥开腋窝部脂肪组织,可以寻得这一对体积较大的淋巴结。
3. 臂淋巴结
位于浅层皮下结缔组织之中,紧贴左右侧肱二头肌肌腹,呈卵圆形,可由腋窝部向外沿肩胛下肌寻找。
4. 胸内淋巴结
这个部位的淋巴结近圆形,其数目和部位分布的变化较大,一般可以在下述几处观察到淋巴结:即胸腺背侧偏外方的脂肪组织中,气管以及气管分支处的后方。摘取时,用剪子将胸骨剪断,将胸腔左右打开,露出位于心脏上方的左右胸腺。在左右两叶胸腺的里侧,支气管分支部相对应处,附着有3、4个胸腺淋巴结。因为颜色与白色的胸腺相似,摘取时需加注意。
5. 腹股沟部淋巴结
近乎肾形,浅居左和右臀肌深部的一个陷窝之中,其头端是坐骨神经的发出部。从最前端剪断腰背部肌肉群,剥开其浅层,逐渐向尾端掀起,可以找到该对淋巴结。由于这一对淋巴结体积较小,若不慎搅乱了它们的局部关系,不易重新找到。
6. 胰部淋巴结
为紧贴的近乎球形的一对,中间有腹腔血管穿过,位居左右肾脏内侧缘和腹主动脉之间,近肾上腺之尾侧端。将肾脏向内侧翻起,剥开脂肪组织,即可在不破损腹内大血管的情况下取得肾门部淋巴结。摘取时,左淋巴结附着在肾动脉、肾静脉的腹侧,可以很容易摘出,而右淋巴结位于肾动脉、肾静脉的背侧,看不见也不好摘出。因此,可把右肾向左肾方向翻,就可看到右淋巴结附在腹主动脉附近,可以很容易地摘出。
7. 肠系膜淋巴结
这是小鼠全身各部位淋巴结中最大,最易于寻找的一个,形如蚯蚓,延伸于肠系膜的脂肪组织之中。先寻得盲肠,沿肠系膜上溯,剪开肠系膜组织,摘下淋巴结。
8. 腰部淋巴结
腰部淋巴结分居于腹主动脉的两侧,附着在其分叉部的上方,两淋巴结皆为卵圆形,左侧腰部淋巴结的位置比较靠近尾端。
9. 尾部淋巴结
形状近球形,位居腹主动脉分支处,偏靠右侧,体积比较小,要细心寻找。
10. 胃部分淋巴结
其位置可有一些变化,大多数可以在小弯部寻得一个极小的淋巴结,偶或于贲部或食道下端部可得两个淋巴结。
11. 腋窝部淋巴结
近球形,位于左右腋窝浅表的皮下脂肪组织中,不难找到。但剖取时不能从局部分开皮肤,否则解剖关系搅乱,不易找到。
小鼠淋巴结数目和长径
1. 淋巴结数目
多数部位只见一个淋巴结,但在颈浅部、胸内部、胃部、胰部以及肠系膜部都可见到2~3个淋巴结,也有多至4个,其中以胸内淋巴结数目变化的情况较多。不同部位剖得淋巴结的概率是不同的。例如颈深部,尾部或坐骨部的淋巴结难以寻找,要求比较纯熟的解剖技术和细心的操作;而寻找颈浅部、腋窝部或肠系膜部的淋巴结则容易成功。
2. 淋巴结的长径
绝大多数淋巴结的长径在2~3.5 mm,最大者为肠系膜淋巴结,其长径都在10 mm以上,最小者为颈深部,坐骨部和尾部淋巴结,长径皆等于或小于1 mm。一般正常淋巴结,其长径都不超过4 mm。