Annexin V实验对照设置
Source: Elabscience®Published: 2022-09-07
Annexin V实验对照设置
Annexin V是常用的检测细胞凋亡的方法，一般通过流式细胞仪来检测。为保证实验结果的准确性，方便后续数据分析，通常需要设置不同对照实验组。
①样本不带自发荧光：
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组别 |
Annexin V |
核染料 |
样本类型 |
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空白对照 |
- |
- |
不做任何处理的细胞 |
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生物学对照 |
+ |
+ |
不做任何处理的细胞 |
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单阳对照1 |
+ |
- |
有明显凋亡的细胞 |
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单阳对照2 |
- |
+ |
有明显凋亡的细胞 |
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实验组 |
+ |
+ |
实验组细胞 |
②样本带自发荧光
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组别 |
Annexin V |
核染料 |
样本类型 |
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空白对照 |
- |
- |
不做任何处理无自发荧光的细胞 |
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生物学对照 |
+ |
+ |
不做任何处理的细胞 |
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单阳对照1 |
+ |
- |
无自发荧光有明显凋亡的细胞 |
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单阳对照2 |
- |
+ |
无自发荧光有明显凋亡的细胞 |
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单阳对照3 |
- |
- |
带自发荧光的细胞 |
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实验组 |
+ |
+ |
实验组细胞 |
空白对照：调节阈值和仪器电压。
生物学对照：排除实验操作对实验结果的影响，扣除荧光背景，同时还可以作为实验组划门的依据。
单阳对照：调节补偿，同时也可以辅助调节该通道的电压，防止信号超出仪器接受范围。
注意事项：
*单阳对照组细胞一定要用明显有凋亡的细胞，因为调节补偿需要有足够的阳性信号
*样本带自发荧光需要设置三管单阳对照，确保每一管都只有一种荧光
实验组：检测实验结果。
Tips：
样本为贴壁细胞：
*细胞培养基中漂浮的细胞需要收集，与后续收集的贴壁细胞一起检测
*避免人为操作带来的细胞损伤，如：胰酶消化时间要适宜，消化贴壁细胞时操作要轻柔等
*尽量不使用含EDTA的胰酶，因为EDTA会影响Annexin V与PS的结合。如果一定要用含EDTA的胰酶，终止消化后要将细胞洗涤干净，尽量去除EDTA
*细胞比较难消化时可以分批次进行消化，避免先消化下来的细胞被过度消化导致假阳性结果
