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文献解读 | Elabscience®助推细胞DNA复制障碍相关研究

Source: Elabscience®Published: 2022-03-03



法国蒙彼利埃蒙彼利埃大学(Universite´ de Montpellier)CNRS胡曼研究所(Institut de Ge´ ne´ tique Humaine)Camilla Frattini和Alexy Promonet教授团队,于2021年3月18日在Molecular Cell上发布了一项重要研究成果。


Molecular Cell期刊



文章标题:

TopBP1 assembles nuclear condensates to switch on ATR signaling

期刊:

Molecular Cell

第一作者单位:

蒙彼利埃蒙彼利埃大学(Universite´ de Montpellier)

通讯作者单位:

蒙彼利埃蒙彼利埃大学(Universite´ de Montpellier)

影响因子:

17.970(2021年)


研究摘要


ATR检查点信号,对于细胞DNA复制障碍的应答至关重要。研究者使用了光遗传学平台,发现ATR的主要激活剂TopBP1,存在大量自组装的微米级聚合物。


这些opto-TopBP1聚合物,是团簇状球形纳米颗粒的功能主体。TopBP1聚合物的形成是可逆的,并且与TopBP1伴侣蛋白共定位。


研究表明,TopBP1聚合物是一种分子开关,可以增强ATR对磷酸化检查点激酶1(Chk1)的活性,并减缓DNA复制功能。


而ATR激活域中关键残基的氨基酸,反过来也会影响TopBP1聚合物的形成,从而破坏ATR/Chk1信号。在生理状态条件下纯化后的TopBP1,可进行液相分离


研究结论:ATR信号的机制与TopBP1聚合物相辅相成,互相制约。


                                                                         

实验设计


01

将TopBP1基因,构建到含拟南芥cryptochrome2(Cry2)的表达质粒中;

02

质粒转染到HEK293细胞内,进行过表达;

03

设置野生型,W1145R(AAD区)对照比较;

设置野生型,W1145R(AAD区)对照比较


04

设置过表达紊乱的ETAA1-AAD,和正常过表达做对照;

设置过表达紊乱的ETAA1-AAD,和正常过表达做对照

05

通过荧光显微镜,观察TopBP1的表达水平、部位及状态。

opBP1的表达水平、部位及状态


研究发现及创新


①      TopBP1蛋白可以自组装成聚合物,形成蛋白支架;


②      TopBP1蛋白通过聚合物行使功能;


③      纯化后的蛋白,通过液相分离,在体外生理环境,也可自组装形成聚合物的蛋白支架结构;


④      对TopBP1聚合关键基因进行修改,会改变协调作用,阻碍聚合物的形成;


⑤      TopBP1聚合物的形成,可能是对DNA复制起阻碍作用的一个基本研究原理和方向。


细胞DNA复制障碍研究中使用产品


研究中使用Elabscience®产品


产品名称

产品货号

应用

靶标检测

检测样本

mCherry Monoclonal Antibody

E-AB-20087

WB,IF

mCherry

表达TopBP1蛋白HEK293细胞



阅读该团队研究论文请点击以下链接:

原文阅读




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