文献解读 | Elabscience®助推细胞DNA复制障碍相关研究
Source: Elabscience®Published: 2022-03-03
法国蒙彼利埃蒙彼利埃大学(Universite´ de Montpellier)CNRS胡曼研究所(Institut de Ge´ ne´ tique Humaine)Camilla Frattini和Alexy Promonet教授团队,于2021年3月18日在Molecular Cell上发布了一项重要研究成果。
文章标题:
TopBP1 assembles nuclear condensates to switch on ATR signaling
期刊:
Molecular Cell
第一作者单位:
蒙彼利埃蒙彼利埃大学(Universite´ de Montpellier)
通讯作者单位:
蒙彼利埃蒙彼利埃大学(Universite´ de Montpellier)
影响因子:
17.970(2021年)
研究摘要
ATR检查点信号,对于细胞DNA复制障碍的应答至关重要。研究者使用了光遗传学平台,发现ATR的主要激活剂TopBP1,存在大量自组装的微米级聚合物。
这些opto-TopBP1聚合物,是团簇状球形纳米颗粒的功能主体。TopBP1聚合物的形成是可逆的,并且与TopBP1伴侣蛋白共定位。
研究表明,TopBP1聚合物是一种分子开关,可以增强ATR对磷酸化检查点激酶1(Chk1)的活性,并减缓DNA复制功能。
而ATR激活域中关键残基的氨基酸,反过来也会影响TopBP1聚合物的形成,从而破坏ATR/Chk1信号。在生理状态条件下纯化后的TopBP1,可进行液相分离。
研究结论:ATR信号的机制与TopBP1聚合物相辅相成,互相制约。
实验设计
01
将TopBP1基因,构建到含拟南芥cryptochrome2(Cry2)的表达质粒中;
02
质粒转染到HEK293细胞内,进行过表达;
03
设置野生型,W1145R(AAD区)对照比较;
04
设置过表达紊乱的ETAA1-AAD,和正常过表达做对照;
05
通过荧光显微镜,观察TopBP1的表达水平、部位及状态。
研究发现及创新
① TopBP1蛋白可以自组装成聚合物,形成蛋白支架;
② TopBP1蛋白通过聚合物行使功能;
③ 纯化后的蛋白,通过液相分离,在体外生理环境,也可自组装形成聚合物的蛋白支架结构;
④ 对TopBP1聚合关键基因进行修改,会改变协调作用,阻碍聚合物的形成;
⑤ TopBP1聚合物的形成,可能是对DNA复制起阻碍作用的一个基本研究原理和方向。
研究中使用Elabscience®产品
产品名称 |
产品货号 |
应用 |
靶标检测 |
检测样本 |
WB,IF |
表达TopBP1蛋白HEK293细胞 |
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