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产品常见问题

Elabscience® 整理汇集了抗体&蛋白产品应用过程中最常见问题的解答(FAQs),旨在更高效地为客户提供技术支持。

  • 我们的抗体是浓缩型的,抗体最终使用浓度除了跟抗体本身浓度有关,也跟样本中目的蛋白的丰度有关,所以我们说明书提供的抗体推荐稀释比是一个范围,最终稀释比例是需要您通过预实验确定的,当然您也可以咨询我们的技术团队给您推荐一个合适的稀释比来摸索实验条件。

    IHC是免疫组化实验,使用的切片一般包含有IHC-P(石蜡切片)和IHC-F(冰冻切片)两种。

    首先客户需要根据抗体说明书&预实验结果来预估一下抗体的使用量,不同的样本,因抗原的表达量不同,抗体稀释比会有差异的。 例如:某个抗体的IHC实验,预实验确认按稀释比1:50计算,通常情况下,一张切片需要加入稀释后的抗体100μl,也就是一张切片需要2μl抗体,20μl大概可以做10张切片。

    抗体说明书中提到的物种是确认可以做的,但不能保证抗体可用于未经验证的物种, 即使序列比对同源性高。抗体是否能识别其它物种样本内的蛋白涉及许多因素,我们无法做出预估。如果没有其它的选择,您必须考虑购买抗体用于未验证的物种,我们建议您将免疫原序列与您的目的蛋白序列进行比对,同源性高的话成功的可能性会比较大。如果您购买的抗体是用于未经验证的物种或者实验应用,一般无法提供产品的更换或者退款。

    一般抗体的说明书都会列出该抗体经验证适用于何种实验的类型(如: WB、IHC、IP、IF等), 如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,可能是我们这边没有做相应的验证,或者验证的样本效果不太好,一般如果没有的应用或者反应性不推荐客户使用,请尽量根据说明书列出的已验证的类型来选择适合你实验的抗体。 如果客户想尝试,可以提前咨询技术支持或者购买小规格进行相应实验尝试,但没有做出预期的结果,一般无法提供产品的更换或者退款。

    二抗根据一抗的来源和客户的实验需求来选择。 先看实验所用一抗的种属来源和亚型。根据一抗种属来源和亚型来决定二抗:如一抗是兔来源的IgG,那就选抗兔IgG的二抗,例如Goat Anti-Rabbit IgG;如一抗是小鼠来源的IgM,那就选抗小鼠IgM的二抗,例如Goat Anti-Mouse IgM。 标记物的选择。常见的标记物有有HRP、Biotin、荧光素等。 ELISA常用Biotin标记的二抗,后接一个链霉亲和素标记的HRP起到进一步信号放大作用,用TMB底物显色; WB主要选择HRP标记的二抗,用ECL底物发光液显色; IHC一般也是选择HRP标记的二抗,推荐使用免疫组化试剂盒(E-IR-R217或最新的E-IR-R220/221),一般用DAB底物液显色; IF可按实验需要选择不同荧光素标记的二抗,如FITC、Cy3、PE等均可(尽量避开细胞的自发荧光),通过荧光显微镜检测荧光。

    阳性对照的使用是一个实验中确定抗体及检测系统是否正常工作的依据,也是确定待测标本中是否存在待测蛋白的一个依据!尤其是检测的标本不确定是否有待测蛋白表达时。因此当实验没有阳性结果出现时,最好选择实验合适的阳性对照,大部分说明书上都有推荐的阳性对照;或者根据说明书上的SwissProt 或 Omnigene 数据库查找,这些数据库经常会列出该蛋白在哪些组织里面高表达,这些样本可以作为合适的阳性对照。

    因为同一蛋白在不同的种类的细胞中可能由于转录后有不同的剪切体、翻译后有不同的修饰方式,比如糖基化、泛素化等,分子量并不是唯一不变的,另外,蛋白官网Uniprot上可以查找到蛋白不同的亚型分子量大小是有差异的。所以文献上查到的分子量与说明书上抗体分子量有些会有一定的差异。(可以多查一些文献参考确认目的蛋白在目标样本中的分子量)。

    修复条件一般为高温高压或者微波加热修复。 例如:抗原修复(高压法) :压力锅中加入足以淹没切片的 10 mmol/ml 的枸橼酸盐缓冲液(pH 6.0) (配制:将抗原修复液溶于相应体积 ddH2O中,混匀),加热至沸腾,切片置耐热塑料切片架上,放入锅中,盖好锅盖,扣上压力阀,继续加热,设置保压 4 min,时间到后打开放气阀放气,压力归零后开锅盖将内锅取出放置室温冷却,待溶液冷却至室温后取出切片(约30 min)。 抗原修复(微波法) :烧杯中加入足以淹没切片的 10 mmol/ml 的枸橼酸盐缓冲液(pH 6.0) (配制:将抗原修复液溶于相应体积 ddH2O中,混匀),加热至沸腾,切片置耐热塑料切片架上,放入烧杯中,中小火加热30min后取出,放置室温冷却,待溶液冷却至室温后取出切片(约30 min)。 IHC修复液的选择建议参考抗体使用说明书,或者参考以下方案:人体样本,优先推荐使用pH9.0的EDTA修复液(临床样本);大/小鼠样本,优先推荐使用pH6.0的枸橼酸修复液(科研样本)。

    默认按照说明书标注的形式发货;如果有特殊需求,需要根据蛋白情况确定。原则上,冻干粉蛋白可以发液体形式,液体蛋白不能发冻干粉形式。

    我们的蛋白有液体和冻干粉2种形式,一般来说冻干粉可以用冰袋、蓝冰、干冰运输;液体可以用蓝冰或干冰运输。

    内毒素含量小于0.1 ng/μg (1 EU/μg)的蛋白都可以用于细胞培养/注射小鼠。

    我们在售重组蛋白一般不含变性剂,具体见说明书的formulation信息。常见变性剂有:尿素和盐酸胍。

    活性说明的见说明书bio-activity部分;如果说明书显示没有生物活性或则显示生物活性检测中,则说明这个蛋白没有生物活性数据,需要客户自己检测。

    一般通过纯化标签进行亲和纯化,常规有镍柱/His Tag、protein AG/Fc tag、标签抗体凝胶等。

    蛋白的纯化方式一般通过标签进行亲和纯化,无标签的蛋白是在纯化后进行了标签切除。
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