产品常见问题
为了提供更好的客户支持，解决客户关于细胞代谢检测相关产品的疑问，我们整理并发布了关于细胞代谢检测产品最常见问题的解答（FAQs），并将持续更新。
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SOD的酶活中心为金属离子，用EDTA做抗凝剂会螯合金属离子，可能会造成SOD酶活降低，影响测值结果。RIPA裂解液中SDS对酶活测定会有干扰，因此不建议使用RIPA裂解液进行组织或细胞的处理。SOD试剂盒要求样本中不能含有SDS、Tween20、NP-40、Triton X-100等去污剂，不能含有DTT、2-巯基乙醇等还原性试剂。每次的实验环境、操作等影响因素都会有点差异，建议每次实验都重新做一下对照孔和空白孔，以便得到更准确的结果。已经匀浆处理的细胞悬液建议当天检测，不能冻存。如果暂时不测，可以直接冻存细胞，一般建议-80℃不超过一个月。可以的，温度能达到100℃且受热均匀就可以了。设置对照孔主要是为了消除样本自身的干扰，如果血液样本存在溶血或脂血现象需要设置对照，如果不存在该现象就可以不设置对照。这个试剂盒的样本匀浆介质只能用说明书中要求的试剂五，不能用生理盐水 （0.9% NaCl）或者PBS（0.01 M， pH 7.4）替换。试剂三存放后可能会有固体析出，是正常现象。在80℃加热溶解，冷却后可以正常使用。是正常现象，从-20℃拿出来后，放在室温解冻完就可以直接使用了。代谢试剂盒中的酶标板都不可以重复使用。用过的孔就不能再用了，如果一次实验用不完所有的孔，可以将暂时不用的板孔用覆膜盖起来，避免污染，下次再用。如果这个试剂盒中酶标板不够用，可以用自己实验室新的黑色酶标板代替。该试剂盒必须使用具备化学发光功能的仪器进行检测，没有化学发光仪，可以使用有化学发光功能的多功能酶标仪，不能使用普通酶标仪检测。该试剂盒检测时，只需要设置化学发光检测，不需要设置激发和发射波长。建议尽量使用新鲜的样本，如果没有新鲜样本，建议样本-80℃冻存不超过一个月，否则AST/ALT酶活降低，对测值有较大的影响。这两个试剂盒的匀浆介质是一样的。样本可以用任意一个试剂盒中要求的试剂进行处理，然后分别检测总铁和亚铁的含量，但要注意这两个试剂盒中的其他试剂不要混用。这个试剂盒对照孔设置的目的是排除样本本身的干扰。每个样本都至少需要一个对照孔和一个测定孔。样本处理过程中所用到的试剂一会对蛋白浓度测定有影响，因此不能用蛋白浓度计算，而是用细胞数进行计算。本试剂盒使用配套细胞裂解液对细胞样本进行处理，加入裂解液后，只需在冰盒上静置10分钟，即可离心取上清液待测，有效提升了细胞破碎效率。虽然代谢试剂盒是基于化学反应检测显色物质的吸光度，但并不是所有试剂盒的显色物质颜色都是特别明显的。有些指标在样本中的浓度比较低，最终呈现的颜色可能通过肉眼无法判断，这是正常的，但是通过仪器是可以检测到的。1 金氏单位/100 mL = 7.14U/L细胞培养液含有酚红会干扰检测结果，所以这个试剂盒不适用于检测细胞培养液。检测细胞培养液样本，推荐E-BC-K766-M试剂盒，该试剂盒的灵敏度更高，且不受酚红的干扰。本试剂盒检测的是样本中的二价铜离子(Cu2+)的含量。如果样本中的铜离子含量超过试剂盒的最大检测值，需要对样本进行稀释。但由于细胞样本中的铜离子含量一般比较低，所以这个试剂盒检测细胞样本不需要进行稀释。这个是正常现象，使用前将试剂一37℃孵育直至澄清就可以了。可能是测定的细胞中铜离子含量较低，样本中铜离子含量低于试剂盒检出限。可适当增加样本细胞数量，以提高检测样本中铜离子的浓度。建议尽量使用新鲜样本检测，如果是冻存样本，可能会使结果偏低或测不出。冻存时间越长，对测值的影响越大，一般样本-80℃冻存不要超过一个月，如果冻存时间超过一个月了，不建议使用。如果组织量不足0.1g，可按照说明书中的组织质量和匀浆液体积等比例减少，需要保证最终的样本匀浆后的体积足够线粒体复合物I检测和蛋白浓度的检测。组织样本需要进行匀浆处理，匀浆程度不同，释放出的蛋白浓度也不同，因此通过检测样本中的蛋白含量，可以校正样本匀浆过程中差异，保证测值的准确性，因此组织样本需要检测蛋白浓度。由于此试剂盒的反应速率比较快，对于时间的控制要求十分精确，因此建议一次测定的样本孔数不超过8个，以保证测值结果的准确性。如果每个样本做2个复孔，那一次检测的样本数量最好不要超过4个。不同样本间存在差异，试剂一具体使用浓度和作用时间及试剂二的具体使用浓度和刺激时间，需进行预实验探索，由预实验确定。试剂盒可以检测的样本数量取决于试剂一的浓度及用量。该试剂盒适用于检测活细胞ROS，组织匀浆处理后，细胞已经破碎死亡，因此该试剂盒不能检测组织匀浆。如果是新鲜组织样本，制备成单细胞悬液，可以检测。ROS试剂盒检测的是强绿色荧光，如果样本自身携带的荧光也是绿色的就有干扰，其他颜色的荧光对该试剂盒检测没有影响。E-BC-F002试剂盒，实验室验证过大肠杆菌，可以检测。E-BC-F003试剂盒是用的探针本身是红色的，随着脂质过氧化物水平的升高会从红色变成绿色，所以您可以检测红光，即流式细胞仪选择 cy3 通道，而不是选择FITC通道。但是需要注意探针浓度不能过高，建议您先选2-3个样本做下预实验试试。该试剂盒的试剂四（显色剂）在温度特别低的情况下会有这种粘稠物析出来，是正常情况，使用前先在37℃下孵育30min再使用。标准品是H2S，不含有其它蛋白，但是样本中存在一些对检测有干扰的蛋白，因此样本需要用试剂二和试剂四进行处理，但标准品不需要，所以标曲和样本测定的操作存在差异。这个试剂盒中，试剂一是用来形成沉淀的（试剂一含有大量的Zn离子会使蛋白变性析出）；试剂二是溶解除了ZnS的其他沉淀；试剂三除了显色还可以溶解沉淀；试剂四除去样本蛋白，蛋白质对显色有干扰；试剂五就是形成亚甲基蓝。试剂四和试剂五是酸性，试剂二在后续操作过程中已经被洗干净，所以加入试剂五之后，反应体系是呈酸性的。具体看溶血程度如何，如果不严重的话可以不用设置对照，没有太大影响。溶血严重的话，不建议检测，即使设置对照也可能会对测值有较大影响。不能用其他试剂替代，需要使用浓盐酸。小鼠皮肤组织参考稀释倍数为20~30倍左右。该稀释倍数仅供参考，由于生物样本间差异性，建议先选取几个样本做下预实验以确定最佳的稀释倍数。用试剂四工作液处理是为了消除样本本身干扰物质，保证测定结果的准确性。对于本试剂盒检测，组织样本需要用试剂二应用液进行匀浆，才能保证MPO的提取效果，如果用生理盐水进行匀浆，可能会影响测值导致检测结果偏低。可能是由于样本中的蛋白析出，建议可以增加样本稀释倍数后再测试一下。影响不大，可以设置对照孔看一下测值情况，如果对照孔OD值低于空白就可以不用设置对照。本试剂盒检测的是样本中游离钙的含量。本试剂盒检测的是样本中L-谷氨酸的含量。不可以，两个酸的浓度不同不能替代。由于样本本身含有肌酐和肌酸，加入试剂一之后，将样本中的肌酸转换成了过氧化氢，但是样本中的肌酐并没有在第一步反应，而是从第二步开始的；前面2 min的反应是为了消耗掉样本自身含有的肌酸，扣除这部分的测值，保证测定结果的准确性。如果您的实验目的是验证这个药物（螯合剂）的作用，那就是可以用的。这个试剂盒的探针就是检测没有被螯合的铁离子，探针不会去抢已经螯合的铁。这个试剂盒检测的是L-谷氨酰胺，检测不了L-丙氨酸-谷氨酰胺。L-丙氨酰谷氨酰胺在培养基中比较稳定，L-丙氨酰谷氨酰胺被细胞摄入之后，在细胞内可以转化成丙氨酸和谷氨酰胺。我们试剂盒检测的目标物质是L-谷氨酰胺，所以也就是说如果您培养基中添加的是L-丙氨酰谷氨酰胺这种物质，用我们试剂盒检测培养基样本，监测不到L-丙氨酰谷氨酰胺的变化情况。使用试剂盒中配套的酶标板，是可以装下不会溢出的。不同厂家的酶标板孔最大容积可能存在微小差异，若换用其他的酶标板，有可能出现溢出的情况。小鼠血清蛋白浓度参考值为50-70g/L,参考稀释倍数60-80倍。由于生物样本间差异性，以上数据仅供参考。这个试剂盒对于溶血严重的样本设置对照效果不大，建议您还是重新取样，用没有溶血的样本进行实验。有文献记录该探针可以和DAPI共染可以，一般建议超声时间3~5min总氨基酸是铜离子和氨基酸反应，有氨基酸的氨基和羧基，与铜离子一起结合形成络合物，而形成蛋白后，氨基和羧基会缩合形成肽键，没有了氨基和羧基，也就反应不了了。这个试剂盒中的裂解液不能裂解细菌，因为该试剂的裂解强度不够。这个试剂盒检测的是PFK1型。该ROS试剂盒检测的ROS没有特指针对某一类ROS，检测的是总的ROS，因为探针的特异性没有那么强。不需要特地将样本进行预处理，在实际检测过程中包含转化这一步。会对酶试剂有影响，从而影响检测结果。可以。可以增加到40 μL~60 μL。这个不可以用白色酶标板，试剂盒中的酶标板用完了的话，需要用黑色不透的酶标板代替。不可以。牛奶样本存在干扰，不适用于该试剂盒。血样离体后会释放氨，用冻存的血清或者血浆检测测值可能会偏低，建议用新鲜的血清或血浆样本进行检测。不能哈，只能用生理盐水。是可以检测唾液样本的。不可以。没有影响。试剂盒设置了对照，影响不大。样本如果有浑浊建议离心后取上清检测。
