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Mouse TNF-α(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit

中文名称:小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫吸附测定试剂盒
别称:

DIF、TNF-alpha、TNFA、TNFSF2、TNF、TNFa

Price: ¥2400.00 ¥1650.00 ¥10200.00

Size:
96T 48T 96T*5
  • 反应性: Mouse
  • 检测范围: 7.81-500 pg/mL
  • 灵敏度: 4.69 pg/mL
产品应用
ELISA
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠TNF-α抗体包被于酶标板上,实验时样品(或标准品)中的小鼠TNF-α会与包被抗体结合。后依次加入生物素化的抗小鼠TNF-α抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素,抗小鼠TNF-α抗体与结合在包被抗体上的小鼠TNF-α结合,生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450 nm波长处测OD值,TNF-α浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中TNF-α的浓度。
反应类型
Sandwich-ELISA
规格
96T / 48T / 96T*5
反应时间
3.5h
反应性
Mouse
检测方法
Colormetric
检测范围
7.81-500 pg/mL
灵敏度
4.69 pg/mL
样本体积
100μL
样本类型
血清、血浆或其他生物体液
特异性
可检测样本中的小鼠TNF-α,且与其它类似物无明显交叉反应
精密度
板内,板间变异系数均<10%
回收率
80%-120%
储存条件
2-8℃/-20℃
操作步骤
数据处理

Q1:试剂盒能检测什么物种?

目前我们的试剂盒检测的种属主要为人,小鼠和大鼠,小部分指标涉及猴,兔,猪和鸡等特殊种属。对于那些命名中带有特定物种名称的试剂盒(如人)是专门针对此物种的。如果说明书中没有指明物种,该试剂盒即在常规哺乳动物种属内是通用的。如果检测物种特殊,建议先跟技术支持确认样本适用性。

Q2:怎样判断样本是否需要稀释或者是否需要其他处理?

试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围,建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果是常规样本类型,可以咨询ELISA技术支持以获取样本的推荐稀释倍数并安排预实验检测。 如果样品中待测物浓度过高或过低,请对样本做适当的稀释或浓缩。如果样本中的分析物浓度远低于试剂盒的最低检测线,建议选择灵敏度更高的试剂盒来检测。

Q3:试剂盒中铝箔袋、覆膜的用途是什么?

除了已真空封存酶标板的铝箔袋外,试剂盒内会附赠一个空的铝箔袋,客户可以将拆卸的酶标板条密封保存于新铝箔袋内并按照说明书要求存放组分。 覆膜是在孵育阶段用于密封板孔的粘性膜,能控制和减少孵育阶段水分的蒸发并更好地维持整板均匀受热,最大程度降低边缘效应对检测结果的影响。

Q4:ELISA试验是否需要技术重复?阳性或阴性对照如何设置?

建议客户做技术重复,一方面确认操作手法,一方面验证和提高实验结果的准确性。 ELISA实验中的阳性对照可以认为就是标准品。阴性对照是与待捡物具有同源性和同质性的空白基质或者已知浓度很低的基质溶液,一般较难获取,如果有可以设置为阴性对照。常规是设定空白对照,即样本稀释液。

Q5:稀释方案

稀释100倍:一步稀释。取5μl样本到495μl标准品&样本稀释液内,做100倍稀释; 稀释1000倍:两步稀释。取5μl样本到95μl标准品&样本稀释液内,做20倍稀释,再取5μl 20倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释1000倍; 稀释100000倍:三步稀释。取5μl样本到195μl标准品&样本稀释液内,做40倍稀释,再取5μl 40倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内,做50倍稀释,最后取5μl 2000倍稀释样本到245μl标准品&样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释100000倍; 每步稀释时取液量不少于3μl,稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀,避免起泡。

Q6:ELISA实验是否需要设置复孔?

为了保证实验结果的准确性,建议标准品和样品都做复孔检测。当然,ELISA实验并非要求一定做复孔/3复孔,客户可根据自己的需求设置实验的复孔与否。

Q7:组织/细胞样本处理中提到的“反复冻融”过程该如何操作?

组织样本:组织研磨后,将其-80℃放置1小时/液氮放置0.5小时,然后置于30℃水浴锅中轻微振荡使其迅速融化,此操作反复1-2次即可。 细胞样本:按上述冻融的操作反复2-3次。若为膜蛋白可以适当超声一下,但需要控制好超声的温度和频率。 样本中建议提前加入蛋白酶抑制剂。常规推荐:PMSF(Cat.E-EL-SR002)。

Q8:测多个指标但是样本量不够怎么处理?

试剂盒的上样量是不能调整的,但是因为试剂盒灵敏度比较低,很多指标可以稀释检测。建议客户将待检指标和样本量的信息及时提供给技术支持,技术支持会进一步确认样本稀释信息并提供检测方案。

Q9:试剂盒为什么建议做预实验?如何进行预实验?

预实验的目的是: 1.确定该试剂盒是否适合您的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费; 2.帮助您熟悉试剂盒的操作流程,尤其是初次使用ELISA试剂盒/更换实验品牌的客户; 3.确定样本稀释与否及稀释倍数是否适合本试剂盒的测定并确认最适样本稀释信息; 4.帮助了解实验过程中可能出现的实验现象或者是问题,好及时作出调整; 具体方法:在正式检测前,选择差异较大的2-3个样本,进行不同浓度的样本稀释,然后按照说明书上的实验操作步骤进行预实验,根据预实验的结果,再结合试剂盒的检测范围来确定样本的最佳稀释倍数。

Q10:为什么有些指标有两个货号的产品去测不同的样本类型呢?

各种样本类型的基质是不一样的,为了降低基质本身的影响并提高常规样本测值的准确性,通常会设定不同体系的ELISA试剂盒,并以不同的货号展示。另外,有些指标在不同样本间浓度差异很大,所以通过不同的产品来满足客户对于操作便捷性的需求。



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