Proteinase K Reagent(10 mg/mL)
中文名称：蛋白酶K
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- 应用性： IF;FCM
| 产品简介 | 蛋白酶K（Proteinase K）是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，用于生物样品中蛋白质的降解。可以用于消化各种蛋白。用于各种常见的分子生物学、细胞生物学等相关实验，例如基因组DNA抽提、酶的消化去除、细胞通透等。
酶活力>30 U/mg。在37°C，以血红蛋白为底物，1分钟内可以产生相当于1微摩尔酪氨酸Folin阳性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量，定义为一个单位蛋白酶K酶活力。 蛋白酶K有效pH范围为pH4.0~12.5，最佳pH范围为pH7.5~8.0。 蛋白酶K的最佳反应温度为65°C，但在65°C或更高的温度蛋白酶K自身的也非常迅速地降解。建议最佳反应温度选择50~55°C。 |
| 保存条件 | -20°C保存，有效期12个月。 |
| 注意事项 | 1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
Q1:若蛋白含有高分子杂带，可能存在二聚体，是否需要加入倍量缓冲液以打开二聚体？
如果蛋白样品中含有比较多的二聚体，可以添加还原剂DTT以帮助打开二聚体。
Q2:可否用于非变性电泳？
不能，本产品含有DTT等还原剂，不可用于非变性电泳中。
Q3:EDTA抗原修复液稀释后的pH需要再次进行调整吗？
本产品在使用时直接按说明书稀释至工作液浓度即可，无需额外调节pH值。
Q4:请问RIPA蛋白裂解液100ul差不多裂解多少细胞？
大约可裂解1X 10^6个细胞，如果使用孔板操作，建议6孔板中每孔加入100-150 μL RIPA裂解液。
Q5:这款缓冲液主要成分有哪些呢？
本款产品中主要成分为Tris-HCl、溴酚蓝、SDS、DTT、甘油等。
Q6:裂解液裂解不开，加入ripa后震荡，然后冰上裂解20分钟再离心，得到的是一团粘稠的液体？
RIPA裂解液裂解细胞后，细胞核内的DNA比较完整的弥散到样本里，形成一团黏糊糊的液体，遇到这种情况裂解后可再超声处理，在35~40％的功率下，超声处理样本1 min（冰浴条件下进行），超声2 s，间隔2 s，确保细胞充分裂解，降低样本粘度。
Q7:若要使用此TBS配制TBST，吐温需要加入多少的量呢？
使用本产品配制TBST时，控制吐温终浓度为0.1%即可。
Q8:细胞裂解液裂解细胞后续做免疫共沉淀可以吗?
不可以, 免疫共沉淀的细胞裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液，常规的RIPA裂解含有SDS，会对蛋白产生变性作用，对蛋白间的相互作用有影响。做免疫共沉淀推荐使用不含变性剂的裂解液。
Q9:裂解液不加矾酸钠可以用吗？
如果是做磷酸化抗体，是必须加矾酸钠抑制剂，如果是做的普通抗体可以只加PMSF（蛋白酶抑制剂）。
Q10:使用该4%多聚甲醛常温固定细胞15min后，细胞膜发生起泡现象，需要更换固定温度为4℃吗？
细胞膜发生起泡现象可能是由于固定时间过长所致，可以适当缩短固定时间，优化固定结果。
