样本少？含量低？试试荧光法试剂盒吧！
Source: Elabscience®Published: 2022-05-20
使用比色法检测指标的时候，有的老师会遇到样本用量太大、样本值无法测出、操作繁琐、用时太长等困扰。此种情况下，不妨试试荧光法试剂盒，能显著提升实验效率。
表一：荧光法检测与比色法检测对比
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方法 |
荧光法 |
比色法 |
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相同点 |
分子光谱 |
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不同点 |
本质 |
发射光谱 |
吸收光谱 |
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灵敏度 |
10-8~10-10 g/mL |
10-5~10-7 g/mL |
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特异性 |
高 |
低 |
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荧光法试剂盒检测原理
具有特定结构的物质在吸收特定波长的能量后，其分子跃迁至激发态。从激发态回到基态的过程中，会以光的形式释放部分能量，形成荧光。
在一定浓度范围内，物质产生荧光的强度（F）与物质浓度（C）成正比，即F = kC。因此，可以通过检测仪器测定荧光强度，从而计算物质的浓度。
图一：物质产生荧光的原理
荧光法测试盒特点
01 灵敏度更高，样本用量少
荧光法测试盒的灵敏度，通常较比色法高出24个数量级，而所需样本用量一般少于比色法检测所需用量。如组织游离脂肪酸的测定，使用比色法需要500μL样本，而荧光法测定仅需0.125μL。对于无法富集或难以获取的样本，荧光法测试盒能满足更多实验需求。
表二：同一指标用比色法和荧光法检测的灵敏度对比
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检测指标 |
比色法灵敏度 |
荧光法灵敏度 |
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过氧化氢 |
410 μmol/L |
0.02 μmol/L |
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ATP |
10 μmol/L |
0.003 μmol/L |
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尿酸 |
7.74 μmol/L |
0.03 μmol/L |
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总胆固醇 |
290 μmol/L |
0.12 μmol/L |
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葡萄糖 |
40 μmol/L |
0.1 μmol/L |
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游离脂肪酸 |
150 μmol/L |
0.58 μmol/L |
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TBARS |
0.85 μmol/L |
0.09 μmol/L |
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蔗糖 |
320 μmol/L |
0.15 μmol/L |
02 特异性更强
光法测试盒采用“酶+荧光探针”的检测原理，使荧光法检测选择性更高，特异性更强。
图二：使用“酶-荧光探针”的方法测定待测指标浓度
03 操作更简单
相较于比色法，荧光法测试盒的试剂组成更简单，检测速度更快，样本适用性更广，能大幅减少实验时间和工作量。
表三：ATP含量测试盒对比
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方法 |
荧光法 |
比色法 |
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试剂个数 |
4 |
9 |
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时间（min） |
5-10 |
50-60 |
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样本适用性 |
组织，细胞 |
组织 |
产品应用
图三：荧光法测试盒的常见应用
荧光法测试盒在众多研究领域有着广泛应用。例如，2021年，南京大学医学院研究团队在Frontiers in Pharmacology发表文章，揭示了SOAT1蛋白在胃癌发展和淋巴结转移中的作用，及Avasimibe在胃癌治疗过程中的抗肿瘤效果。
图四：南京大学医学院团队所发表文献的标题
研究过程中，研究人员使用了荧光法测试盒，对细胞样本的总胆固醇和胆固醇酯含量进行了检测，得到结果如下图[1]：
图五：
A. 敲除SOAT1基因，能显著降低细胞中的胆固醇含量；
B. 使用SOAT1抑制剂Avasimibe（浓度大于10μM），能显著降低细胞中的胆固醇含量。
表四：Elabscience®荧光法试剂盒产品
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指标 |
样本类型 |
研究领域 |
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动物肝脏、肌肉组织样本 |
糖代谢 |
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植物组织 |
糖代谢，光合作用 |
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血清（浆）、尿液等液体样本及动物组织样本 |
肾功能 |
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组织细胞，培养细胞 |
氧化应激 |
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血清、血浆、尿液、体液、细胞 |
糖代谢，糖尿病 |
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血清(浆)、动植物组织，细胞 |
氧化应激 |
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细胞样本 |
糖代谢 |
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血清（浆）、动植物组织样本 |
氧化应激 |
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血清（浆）、动物组织样本 |
氧化应激 |
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血清（浆）、动物组织、细胞 |
氧化应激 |
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血清（浆）、动植物组织样本 |
肝功能 |
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血清（浆）、动物组织样本 |
氧化应激 |
