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流式配色原则第三课:互斥抗原

Source: Elabscience®Published: 2024-04-24

前期,我们学习了流式配色原则:强弱搭配荧光干扰(点击蓝字回顾),今天继续学习第三大原则——互相排斥的抗原允许溢漏,指的是配色时要注意抗原之间的相互关系,如果是互斥关系,则可以使用高干扰组合

由于流式细胞仪通道数量有限,再加上多色流式实验时同时检测指标较多,我们不可避免地会使用高干扰荧光组合。如何使高干扰荧光组合对抗原检测的影响降到最低呢?这时我们可以考虑抗原间的相互关系,如果有互斥抗原,则可优先考虑高干扰荧光组合。

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互斥是指两种抗原不会同时表达在一种细胞上,比如CD3+T细胞中,有一群细胞表达CD4,不表达CD8,另外一群细胞表达CD8,不表达CD4,CD4和CD8就属于互斥关系。即表达A不表达B,表达B不表达A。配色时,互斥的抗原是允许荧光溢漏的。

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图1. CD4和CD8为互相排斥抗原

还有哪些抗原是互相排斥的呢?比如CD3和CD19,CD3是T细胞的Marker,CD19是B细胞的Marker,这两个抗原共同检测时,就可以使用高干扰组合。

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图2. CD3和CD19为互相排斥抗原

C57BL/6小鼠NK细胞的标志物为CD3-NK1.1+,即表达NK1.1,不表达CD3,那CD3和NK1.1这两个指标就可以使用高干扰组合, 如图所示:

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图3. CD3和NK1.1为互相排斥抗原

说完互斥抗原,哪些情形下可能存在高干扰呢?荧光光谱重叠多、串联染料、多激光激发情况下,易出现荧光高干扰。如果想了解更多详细信息,可以查看我们上期流式课堂“流式配色原则第二课:荧光干扰”(点击回顾)中对荧光溢漏的三种情况的介绍。


流式课堂|流式配色原则第二课:荧光干扰

流式配色原则第四课:共表达抗原

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