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流式配色原则第四课:共表达抗原

Source: Elabscience®Published: 2024-05-23

前面几期流式课堂,我们一起学习了流式配色的三大原则——强弱搭配荧光干扰互斥抗原(点击回顾),今天来看第四个原则——共表达的抗原避免溢漏。这条原则指的是配色时要注意抗原之间的相互关系,如果抗原间是共表达关系,要避免荧光溢漏对共表达抗原的影响

抗原间的相互关系分为三种,分别是互斥关系子代与亲代的关系共表达关系

互斥关系是指两种抗原不会同时表达在一种细胞上,即表达A不表达B,表达B不表达A。配色时,互斥的抗原是允许荧光溢漏的。详细内容可以参考《流式课堂 | 流式配色原则第三课:互斥抗原》

子代与亲代关系是指抗原之间是上下级关系,即下级抗原是在上级抗原的基础上进行分析的,这部分的内容我们在下期推文中再详细介绍。

共表达关系是指两种抗原同时表达在一种细胞上。配色时,共表达抗原要搭配荧光干扰较小的荧光素,尽量避免荧光溢漏。本期我们就来学习共表达关系。

什么样的抗原属于共表达抗原呢?以Treg细胞为例,Treg细胞同时表达CD25和Foxp3,那么CD25和Foxp3就属于共表达关系。在这种情况下,CD25和Foxp3需要搭配相互之间没有溢漏的荧光素,比如搭配APC和PE,因为这两个荧光素是几乎没有干扰的,因此可获得预期的数据结果。

图1. Treg中CD25和Foxp3为共表达抗原

在多色流式实验中,如果两个共表达Marker使用的荧光染料之间干扰较严重,则会对圈门造成干扰,影响实验结果的准确性。虽然我们也能通过调节补偿来减少光谱重叠的影响,但对被干扰通道荧光灵敏度降低的影响是无法通过后续的结果分析来消除的。

无干扰↓

干扰严重↓

图2. 荧光干扰的影响

如果共表达抗原之间有严重荧光干扰会怎么样呢?那结果就可能出现如上图右所示的情况,虽然进行了补偿调节,但得到的目的细胞的比例跟实际有差别。

下期流式课堂将给大家带来流式配色原则中子代与亲代关系的分析,请持续关注流式课堂专栏!


流式配色原则第三课:互斥抗原

流式配色原则第五课:子代与亲代

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