流式实验中常见组织样本单细胞悬液制备方案
Source: Elabscience®Published: 2023-04-25
众所周知,好的样本制备是实验成功的一半。单细胞是流式细胞术对细胞进行分析检测的前提条件。因此,在进行流式实验时,制备出合格、分散的单细胞悬液是流式细胞术样本制备技术中重要的一环,它既要求组织分散成为单个细胞,又要维持细胞的固有属性及生物学特性。今天,给大家列举几个常见流式组织样本单细胞悬液制备方案,助力流式实验。
脾脏
脾脏单细胞悬液制备操作步骤:
1 取出小鼠脾脏,并浸泡于干净的PBS溶液中。
2 将脾脏置于200目筛网中,用组织研磨棒轻轻研磨至没有明显红色块状物。
3 用15 mL PBS冲洗筛网,并将冲洗液收集于15 mL离心管中,300 g离心5 min,弃上清。
4 加入2 mL 1×红细胞裂解液重悬细胞,室温裂解2~3 min后,立刻加入10 mL PBS,300 g离心5 min,弃上清。
5 用细胞染色缓冲液重悬脾脏细胞,将细胞悬液用200目筛网再次过滤后计数, 并调整细胞浓度至1×107个/mL。
流式实验结果展示:
小鼠脾脏T细胞(3色)检测
骨髓
骨髓样本单细胞悬液制备操作步骤:
1 用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤,眼科剪小心剪开,并分离下肢的皮肤。将皮肤往下在脚踝处剪断,往上在髋关节处剪断,游离出小鼠的两条后肢。
2 小心剥离肌肉,分别剪下Femurs(股骨)和Tibias(胫骨),剪去两端软骨,露出红色的骨髓腔。注意在该过程中应保留尽可能多的骨髓腔。
3 用1 mL的无菌注射器,吸取1 mL PBS溶液,轻轻插入骨髓腔,冲洗骨髓腔以获得骨髓。重复2~3次,可冲出绝大部分细胞。冲洗完后,用移液器轻轻吹打细胞,将细胞团吹散。
4 将冲洗液用200目的滤网过滤,滤液收集于15mL离心管中,300 g离心5 min,弃上清。
5 用细胞染色缓冲液重悬细胞并计数,调整细胞浓度至1×107个/mL。
流式实验结果展示:
小鼠骨髓巨噬细胞细胞(3色)检测
胸腺
胸腺单细胞悬液制备操作步骤:
1 取出胸腺并浸泡于干净的PBS溶液中。
2 将胸腺置于200目筛网中用组织研磨棒轻轻研磨,至没有明显块状物。
3 用15 mL PBS冲洗筛网,并将冲洗液收集于15 mL离心管中,300 g离心5 min,弃上清。
4 用细胞染色缓冲液重悬胸腺细胞并计数,调整细胞浓度至1×107个/mL。
流式实验结果展示:
小鼠胸腺T细胞(2色)检测
淋巴结
淋巴结单细胞悬液制备操作步骤:
1 取出淋巴结,并浸泡于干净的PBS溶液中。
2 用2.5 mL无菌注射器吸取培养液,左手用镊子夹持淋巴结,右手持注射器,小心插入淋巴结中吹打,至淋巴结细胞完全被吹打干净,观察只剩余白色的结缔组织和脂肪组织为止。
3 将吹打出来的胸腺细胞用200目筛网过滤,收集于15 mL离心管,300 g离心5 min,弃上清。
4 用细胞染色缓冲液重悬胸腺细胞,计数,并调整细胞浓度至1×107个/mL。
流式实验结果展示:
小鼠淋巴结T/B细胞(4色)检测
流式细胞术对细胞的各种参数分析必须基于单细胞的基础上,因此在处理不同组织时,要尽可能采用对细胞损伤小、产率较高的单细胞悬液制备方法,以最大限度地保持细胞原有特性。