流式实验中常见组织样本单细胞悬液制备方案

        众所周知，好的样本制备是实验成功的一半。单细胞是流式细胞术对细胞进行分析检测的前提条件。因此，在进行流式实验时，制备出合格、分散的单细胞悬液是流式细胞术样本制备技术中重要的一环，它既要求组织分散成为单个细胞，又要维持细胞的固有属性及生物学特性。今天，给大家列举几个常见流式组织样本单细胞悬液制备方案，助力流式实验。

脾脏

脾脏单细胞悬液制备操作步骤：

1 取出小鼠脾脏，并浸泡于干净的PBS溶液中。

2 将脾脏置于200目筛网中，用组织研磨棒轻轻研磨至没有明显红色块状物。

3 用15 mL PBS冲洗筛网，并将冲洗液收集于15 mL离心管中，300 g离心5 min，弃上清。

4 加入2 mL 1×红细胞裂解液重悬细胞，室温裂解2~3 min后，立刻加入10 mL PBS，300 g离心5 min，弃上清。

5 用细胞染色缓冲液重悬脾脏细胞，将细胞悬液用200目筛网再次过滤后计数, 并调整细胞浓度至1×10⁷个/mL。

 流式实验结果展示：

小鼠脾脏T细胞（3色）检测

骨髓

骨髓样本单细胞悬液制备操作步骤：

1 用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，眼科剪小心剪开，并分离下肢的皮肤。将皮肤往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，游离出小鼠的两条后肢。

2 小心剥离肌肉，分别剪下Femurs（股骨）和Tibias（胫骨），剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔。注意在该过程中应保留尽可能多的骨髓腔。

3 用1 mL的无菌注射器，吸取1 mL PBS溶液，轻轻插入骨髓腔，冲洗骨髓腔以获得骨髓。重复2~3次，可冲出绝大部分细胞。冲洗完后，用移液器轻轻吹打细胞，将细胞团吹散。

4 将冲洗液用200目的滤网过滤，滤液收集于15mL离心管中，300 g离心5 min，弃上清。

5 用细胞染色缓冲液重悬细胞并计数，调整细胞浓度至1×10⁷个/mL。

流式实验结果展示：

小鼠骨髓巨噬细胞细胞（3色）检测

胸腺

胸腺单细胞悬液制备操作步骤：

1 取出胸腺并浸泡于干净的PBS溶液中。

2 将胸腺置于200目筛网中用组织研磨棒轻轻研磨，至没有明显块状物。

3 用15 mL PBS冲洗筛网，并将冲洗液收集于15 mL离心管中，300 g离心5 min，弃上清。

4 用细胞染色缓冲液重悬胸腺细胞并计数，调整细胞浓度至1×10⁷个/mL。

流式实验结果展示：

小鼠胸腺T细胞（2色）检测

淋巴结

淋巴结单细胞悬液制备操作步骤：

1 取出淋巴结，并浸泡于干净的PBS溶液中。

2 用2.5 mL无菌注射器吸取培养液，左手用镊子夹持淋巴结，右手持注射器，小心插入淋巴结中吹打，至淋巴结细胞完全被吹打干净，观察只剩余白色的结缔组织和脂肪组织为止。

3 将吹打出来的胸腺细胞用200目筛网过滤，收集于15 mL离心管，300 g离心5 min，弃上清。

4 用细胞染色缓冲液重悬胸腺细胞，计数，并调整细胞浓度至1×10⁷个/mL。

流式实验结果展示：

小鼠淋巴结T/B细胞（4色）检测

流式细胞术对细胞的各种参数分析必须基于单细胞的基础上，因此在处理不同组织时，要尽可能采用对细胞损伤小、产率较高的单细胞悬液制备方法，以最大限度地保持细胞原有特性。