流式中的隐秘参数-Time应用分享

今天为大家介绍一个在流式实验中非常重要，但却常常被忽视的一个参数—Time。

什么是Time？

Time即“时间”—通常与其他参数共同使用，反映该参数在上机过程中的实时变化情况。这可以给我们带来非常多的信息，让我们在上机时能够获得更加准确全面的分析结果。下面我们就一起来看看Time参数具体的使用场景吧！

首先是在液流稳定性检测上的应用。相信大家在做流式实验时都听说过液流稳定性的重要性。在流式实验时一定要注意液流稳定性，液流不稳定流式结果就会变的很差，还可能出现仪器分辨率下降，CV值变大，甚至检测信号丢失的情况。既然液流稳定性这么重要，怎么去观察液流是否稳定呢？这里就需要用到数量与时间门的组合。

                  图一：液流稳定时流式图

如图所示，将横坐标选择为Time，纵坐标选择为Count，就可以看到样本的实时上机速度。正常情况下样本上机速度应基本保持均一。

                 图二：蠕动泵管老化时流式图

如图二所示，将横坐标选择为Time，纵坐标选择为Count，就可以看到样本的实时上机速度。在图示结果中，我们可以很清晰的看到样本液流非常不稳定，速度时快时慢，且中间还会有很多时间吸取不到样本。这对数据采集是非常不利的，在实验当中碰到这样的结果就一定要小心，必要时可重新上样检测。

液流不稳定可能有多种原因，比如管道堵塞、蠕动泵管老化等。我们对Time图进一步分析，可以找到具体引起液流不稳定的原因。在图二中，我们可以看到液流变化呈现很明显的周期性规律，这种情况是由于蠕动泵管某一段老化引起，每次挤压到这部分泵管时，就会出现吸取不到样本的情况，此时就需要更换蠕动泵管。

如果是管道堵塞，Time图则大概率会是如下两种情况：

                图三  管道暂时性堵塞流式图                                              图四  管道永久性堵塞流式图

在图三中可以看到，在出现一大段吸取不到样本的时间后，突然出现了一段很快的上样速度。这往往是由于样本将管道堵塞，导致吸取不到样本。随着上样时间的延续，管道内压力不断加大，在达到一定压力后，堵塞部分突然被冲开，大量细胞通过，导致上样速度陡增。当然，也有可能出现堵塞更加严重，最终直接导致管道堵死的情况（如图四所示）。所以，在发现仪器出现堵塞的情况时，一定要及时停止上样，做好相应的清洗，并检查样本是否有结团或者细胞密度过大的情况，选择相应的过筛网或对样本做适当稀释。

当然，Time的应用远远不止判断液流稳定性。如与荧光通道结合，可以找到上机过程中因仪器不稳定、前一管样本残留等各种意外情况出现的不合理数据，并通过画门排除掉这部分数据，以得到更加真实可靠的结果（如图五所示，蓝框部分荧光信号明显与整体样本不符，在实际分析时应排除掉此部分）。

            图五 时间门与荧光通道设门流式图

同时，在检测一些表达量会随时间快速变化的指标时，也可以打开Time来观察指标的实时变化情况。

今天关于Time参数的分享就到这里了，各位小伙伴在实际实验过程中是否还有其他关于Time参数的应用呢？