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FcR简介及其对流式实验结果的影响

Source: Elabscience®Published: 2023-05-30

抗体是Y字形分子,分为Fab端和Fc端。Fab端是与目标分子特异性结合的区域,Fc端是Ig与效应分子或者细胞相互作用的部位。

抗体的结构

图一:抗体的结构

Fc受体(FcR)是免疫调节受体中非常重要的受体,主要在先天免疫细胞上表达,能识别并结合抗体的Fc端,引发免疫应答。

按FcR所结合的Ig种类不同可将其分为五类,即IgG(FcγR)、IgE(FcεR)、IgA(FcαR)、IgM(FcμR)和IgD(FcδR)

              IgG抗体的Fc受体分类

图二:IgG抗体的Fc受体分类

IgG类型抗体的Fc受体是FcγR,依据和Fc片段亲和力的强弱,FcγR又可以被分为三个亚家族:FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)

其中,与IgG亲和力FcγRI>FcγRIII>FcγRII。

FcγRII可进一步分为FcγRIIa(CD32a)、FcγRIIb(CD32b)和FcγRIIc(CD32c)三个亚类;

FcγRIII可以进一步分为FcγRIIIa(CD16a)和 FcγRIIIb(CD16b)两个亚类。

表达Fc受体的细胞包括:B淋巴细胞、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、NK细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、人血小板、肥大细胞和嗜碱性粒细胞等,这些细胞在其表面表达多种Fc受体,其中以单核细胞和巨噬细胞尤为显著。


流式细胞术利用荧光标记的抗体区分不同细胞亚群。抗体结合的特异性取决于每个抗体克隆Fab端的独特可变区,但是,抗体的Fc端也会与细胞表面的Fc受体结合,我们称这种结合为非特异性结合。值得注意的是,这种非特异性结合的信号,并不会因为同型对照的使用而被扣除掉,容易导致在流式分析中出现背景增高或甚至假阳性信号的结果。

               FcR对小鼠腹腔巨噬细胞检测的影响

                                                                   图三:FcR对小鼠腹腔巨噬细胞检测的影响

如图如示:小鼠腹腔巨噬细胞,分别使用Purified Anti-Mouse CD16/32 Antibody封闭和未做封闭处理后,检测CD3-PE/Cyanine7和CD11b-FITC的表达情况。

从图中可以看到,封闭后的巨噬细胞检测不到CD3的表达,结果符合巨噬细胞本身的特性。未封闭的样本,检测大部分细胞为CD3与CD11b双阳,而这种情况,并不符合巨噬细胞本身的特性。因此Fc受体封闭在FcR表达高的细胞样本检测中非常必要。

对于表达Fc受体较多的细胞,我们可以在实验方案中,用Fc受体阻断剂减少这些Fc受体非特异性结合引起的背景:

对于人的样本,我们可以使用E-AB-F1236A为封闭剂

货号

产品名称

E-AB-F1236A

Purified Anti-Human CD16 Antibody


对于小鼠的样本,我们可以使用E-AB-F0997A为封闭剂

货号

产品名称

E-AB-F0997A

Purified Anti-Mouse CD16/32 Antibody



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