2-step plus Poly-HRP Anti Rabbit/Mouse IgG Detection System（with DAB Solution）
中文名称：二步法免疫组化试剂盒(兔/小鼠)（附DAB显色液）
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- 应用性： IHC
| 产品简介 | 本公司最新推出的二步法免疫组化试剂盒，将二抗的单价 Fab 片段和过氧化物酶HRP聚合在一起，替代传统方法中的二抗和三抗，直接放大抗原抗体结合的信号，既保留了抗体特异性结合抗原的能力，又可有效地避免聚合分子过大而 造成的空间位阻。与传统的 SP 三步法相比，此试剂盒具有简单、快速、敏感等特点，试剂盒不再使用生物素，避免了由于内源性生物素所造成的背景染色。本产品可用于检测一抗是Rabbit和Mouse来源的单克隆抗体或多克隆抗体，本品独特的聚合物辅助剂有利于大分子的检测系统更好地结合所检测的一抗分子。此检测系统是目前已知的灵敏度最高的免疫组化检测系统。
附带的DAB显色液自带稀释液，避免由于各地方水酸碱度的不同对 DAB 显色所造成的影响。 |
| 保存条件 | 2~8°C避光保存，不得冻存，有效期12个月。开封使用后，请在6个月内用完。 |
| 注意事项 | 1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
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| E-IR-R211 | 2-step plus Poly-HRP Anti Rabbit/Mouse IgG Detection System | 18mL , 6mL , 3mL |
Q1:BSA做WB实验推荐什么浓度呢？
用TBST稀释，BSA浓度 2-5%。
Q2:跑胶结束后如何快速去除可能遮挡条带的溴酚蓝？
延长电泳时间可以使溴酚蓝与条带分开，对于小分子量蛋白建议更换浓度更适合的分离胶缓冲体系。
Q3:BCA浓度测得蛋白浓度3mg/ml，但加入缓冲液后发现无蛋白条带出现，是什么原因？
建议进行对比实验，设置BSA为阳性对照，与蛋白样本裂解液同时加入缓冲液混匀煮沸变性，上样进行电泳观察条带情况。
Q4:货号E-IR-R304A和E-IR-R304B的WB实验试剂盒里面是否包含E-IR-R305凝胶试剂？
E-IR-R305凝胶试剂盒是不包含在E-IR-R304A和E-IR-R304B里面的，需要单独购买凝胶试剂盒；
Q5:RIPA lysis buffer未开封在室温下存放了24小时能否继续使用？反复冻融的次数有限制吗？
本产品在室温下（25℃左右）放置24小时对产品效果无明显影响，可继续使用。但建议收货后立即分装并于-20℃保存，反复冻融次数不超过5次。
Q6:裂解液想问一下PMSF 跟Na3VO4的作用是？还有这个产品是什么浓度，如何使用？
这两个都是酶的抑制剂，作用是预防蛋白的降解。 PMSF常作为蛋白酶抑制剂被应用在生化和分子生物学实验中，是丝氨酸蛋白酶的抑制剂，可抑制胰蛋白酶（trypsin），糜蛋白酶（chymotrypsin）和AChE的活性。 Na3VO4是磷酸酶抑制剂，抑制ATP酶、碱性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶。 试剂盒这两个产品是100X的，使用前按照1:100的比例加入到PIPA裂解液中。
Q7:肿瘤组织切块在4%多聚甲醛固定液中，常温固定可以长期保存吗？
通常情况下，在4% 多聚甲醛中固定后，肿瘤组织切块可以在室温下保存数周至数月时间。对于长期保存，更好的做法是将固定后的组织样本转移到含有PBS等缓冲液的液体中，并且存放在4摄氏度的冰箱中，确保其稳定性和适用性。
Q8:提取悬浮细胞蛋白质时，能否直接加入该产品煮沸变性？
可以使用1×缓冲液直接进行煮沸，但需要注意此操作后得到的蛋白上样缓冲液不可用于BCA测浓度。
Q9:加入缓冲液的蛋白煮样时无沉淀，但第二天取出加样时有沉淀出现是因为什么呢？该如何解决？
变性后的蛋白缓冲液出现沉淀可能与蛋白样品中的离子浓度有关系，在温度变化过程中出现沉淀，可通过37℃以下的水浴孵育溶解。若仍有少量沉淀无法溶解可离心后取上清使用。
Q10:蛋白酶K使用时应该用什么溶液溶解？常用工作浓度是多少？需要在多少度下保存呢？
蛋白酶K有效pH范围为pH4.0~12.5，最佳pH范围为pH7.5-8.0。请根据实验需求尽量用上述适当pH的缓冲溶液，如：10mM Tris-HCl pH7.4-7.8，进行蛋白酶K溶液的配制。 蛋白酶K常用工作浓度为10~100ug/ml，储存液浓度一般为100~200mg/ml，-20℃保存，稀释至工作浓度后应尽快使用，避免长时间保存。
