E-Click EdU Cell Proliferation Flow Cytometry Assay Kit (Green，FITC)
中文名称：E-Click EdU细胞增殖流式检测试剂盒（绿色，FITC）
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- 应用： 细胞增殖
| 检测原理 | 细胞增殖检测广泛应用于细胞活性、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的评价中，直接检测细胞中的DNA合成被认为是最精确的检测细胞增殖的方法。最初广泛使用的检测细胞中DNA合成的方法是放射性标记核苷掺入法，但该方法由于有放射性污染并且很难实现单细胞检测而受到很大的限制，随后逐渐被基于抗体检测的BrdU法所替代。BrdU法步骤繁多，且需要使用BrdU抗体，影响因素较多，稳定性较差。EdU法基于EdU掺入和后续的点击反应，无需使用抗体、操作便捷、检测灵敏度高，是一种在BrdU法基础上升级换代的新方法，将会逐步取代BrdU法。EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)，中文名5-乙炔基-2-脱氧尿苷，是胸腺嘧啶脱氧核苷类似物，EdU可以在DNA合成过程中替代胸腺嘧啶脱氧核苷掺入到新合成的DNA中。另一方面，EdU上的乙炔基能与荧光标记的小分子叠氮化物探针（如FITC Azide、Elab Fluor® 488 Azide、Elab Fluor® 594 Azide、Elab Fluor® 647 Azide），通过一价铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速，被称作点击反应（Click reaction）。通过点击反应，新合成的DNA会被相应的荧光探针所标记，从而可以使用适当的荧光检测设备检测到增殖的细胞。 |
| 检测方法 | 荧光法;流式 |
| 样本类型 | 细胞 |
| 检测时间 | 2 hours |
| 检测仪器 | 流式细胞仪 |
| 荧光 | FITC |
| Ex/Em | 490/530 |
| Channel set | FITC |
| 自备试剂 | PBS(含1%BSA)缓冲液(pH7.2～7.4),PBS（含1% Saponin）缓冲液（pH7.2~7.6）,4%多聚甲醛（溶剂为PBS，pH7.2~7.6）(E-IR-R113),双蒸水 |
| 保存温度 | 该产品可在-20°C避光条件下保存12个月。 |
| 有效期 | 12个月 |
| 运输条件 | 冰袋 |
| E-CK-A371 | E-Click EdU Cell Proliferation Flow Cytometry Assay Kit (Green，Elab Fluor® 488) | 200Assays , 50Assays |
| E-CK-A373 | E-Click EdU Cell Proliferation Flow Cytometry Assay Kit (Red, Elab Fluor® 647) | 200Assays , 50Assays |
| E-CK-A376 | E-Click EdU Cell Proliferation Imaging Assay Kit (Green，Elab Fluor® 488) | 200Assays , 50Assays |
Q1:荧光标记后清洗为什么用的是含通透液的PBS清洗的呢？作用又是什么呢？
皂素的通透是可逆的，一般用皂素通透的实验，后面的清洗都会继续加入皂素以维持细胞通透性。
Q2:流式EdU通透液的问题，客户没有Saponin，是否可以用Triton X-100替代?
可以的，对于流式来说；1% Saponin的通透效果会温和一点；Triton X-100的通透效果会剧烈一点，可能影响结果，不同的样本可能有差异。
建议用0.2%Triton X-100加上3%BSA（PBS配制）来通透细胞，然后离心力一定要注意升速和降速，升速不要超过3，降速不要超过2。这样细胞状态好些，得率高些。1-3% BSA都可以；太低了不行 发挥不了保护载体的作用。
Q3:检测EdU细胞增殖时，在荧光标记过程中，每孔加3%BSA的PBS.，这里的BSA是必须的吗？
3%BSA的作用是在缓冲液给细胞提供载体支撑，减少细胞在离心、洗涤等过程中的机械损伤以及降低细胞损失。悬浮细胞需要用到，如果是贴壁细胞在孔板中检测可以用PBS替代。
Q4:在EDU流式检测法中，使用的洗涤液是含BSA的PBS，其中BSA的作用是什么呢？
加入BSA可以提高PBS的渗透压和离子浓度，使其更接近于细胞内液的环境，从而减少细胞受到剪切力的影响。此外，BSA还具有一定的缓冲性能，有助于维持PBS的稳定性，防止溶液的pH值发生变化，进一步保护细胞。
Q5:EdU流式破膜步骤中，这个1%的saponin可以换成0.1%的triton X-100吗？
可以。因为流式实验中单细胞比较敏感和脆弱，所以破膜要温和。客户如果没有saponin，可以在PBS中加1%BSA或者3~5%的FBS，然后再加入终浓度为0.2%的triton X-100，混匀后作为破膜试剂。
Q6:BrdU法和EDU法检测细胞增殖的差异？
BrdU法步骤繁多，且需要使用BrdU抗体，影响因素较多，稳定性较差。EdU法基于EdU掺入和后续的点击反应，无需使用抗体、操作便捷、检测灵敏度高，是一种在BrdU法基础上升级换代的新方法，将会逐步取代BrdU法。EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)，中文名5-乙炔基-2-脱氧尿苷，是胸腺嘧啶脱氧核苷类似物，EdU可以在DNA合成过程中替代胸腺嘧啶脱氧核苷掺入到新合成的DNA中。另一方面，EdU上的乙炔基能与荧光标记的小分子叠氮化物探针（如FITC Azide、Elab Fluor® 488 Azide、Elab Fluor® 594 Azide、Elab Fluor® 647 Azide），通过一价铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速，被称作点击反应（Click reaction）。
