Tissue Fixation Solution / 4% Paraformaldehyde (without DEPC)
中文名称：组织固定液/4%多聚甲醛 (不含DEPC)
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- 应用性： IHC;IF;FCM
| 产品简介 | 4%多聚甲醛固定液(4% Paraformaldehyde Tissue Fixation Solution)是免疫组化(IHC)、免疫荧光(IF)研究中最常用的固定剂之一，也可以应用于流式分析(FCM)。本产品配制在PBS溶液中，可直接用于组织或细胞的固定，无需稀释。若需使用更低浓度多聚甲醛，可用PBS按比例稀释。
固定液可使细胞或组织的蛋白质凝固，终止内源或外源性酶反应，防止组织自溶或异溶，以保持组织原有的结构和形态。对免疫组化而言更有原位保存抗原的作用，避免抗原失活或弥散。固定液种类很多，常见的有多聚甲醛、甲醛、戊二醛、乙醇、丙酮等。其固定原理不同，各有优缺点。目前在科学研究中多聚甲醛应用最广，通过形成分子间的交联从而使细胞或组织的三维结构得以被固定。多聚甲醛是甲醛的聚合物，性质比甲醛稳定，且对抗原的破坏能力弱于甲醛，因此，科学研究中常用多聚甲醛作为固定剂。 组织学上，4%的多聚甲醛穿透力强，固定均匀，能使组织硬化，有利于切片。本固定剂造成的组织收缩少，损伤小，较为温和，能很好的保存固有物质，保持组织的抗原性和细微结构。此外，多聚甲醛可用于固定并保存脂肪及脂类物质。 本产品固定效果好、应用广，适用于各种常见细胞或组织的固定，对皮肤、肌肉、内脏等均有良好的固定效果，主要作用于蛋白质，无法固定尿酸和糖类等。 本品不含DEPC，不推荐用于原位杂交等需检测核酸的实验。 按照每个样品固定时需要1毫升固定液计算，一个包装的本产品可以固定100个或500个样品。 |
| 保存条件 | -20°C保存，有效期12个月。 |
| 注意事项 | 1. 本产品放置过久其中的醛基可能会被氧化为酸，使溶液pH降低，从而影响后续染色。 2. 不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。 3. 多聚甲醛虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过24 h。 4. 多聚甲醛可长期存在于固定过的细胞或组织样品中，固定完成后用适当的洗涤液或水冲洗数小时仍会有残留，因此后续实验结果容易受醛基影响，须尽量洗去残留的多聚甲醛。 5. 醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，易造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%多聚甲醛固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。 6. 本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 7. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
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| E-IR-R114 | Tissue Fixation Solution / 4% Paraformaldehyde (with DEPC) | 1000mL , 500mL , 100mL |
Q1:蛋白酶K使用时应该用什么溶液溶解？常用工作浓度是多少？需要在多少度下保存呢？
蛋白酶K有效pH范围为pH4.0~12.5，最佳pH范围为pH7.5-8.0。请根据实验需求尽量用上述适当pH的缓冲溶液，如：10mM Tris-HCl pH7.4-7.8，进行蛋白酶K溶液的配制。 蛋白酶K常用工作浓度为10~100ug/ml，储存液浓度一般为100~200mg/ml，-20℃保存，稀释至工作浓度后应尽快使用，避免长时间保存。
Q2:BSA做WB实验推荐什么浓度呢？
用TBST稀释，BSA浓度 2-5%。
Q3:跑胶结束后如何快速去除可能遮挡条带的溴酚蓝？
延长电泳时间可以使溴酚蓝与条带分开，对于小分子量蛋白建议更换浓度更适合的分离胶缓冲体系。
Q4:该产品对于蛋白浓度是否有要求？若蛋白浓度较高是否需要提高缓冲液的浓度？
本产品对蛋白浓度无具体要求，按比例稀释使用即可。
Q5:货号E-IR-R304A和E-IR-R304B的WB实验试剂盒里面是否包含E-IR-R305凝胶试剂？
E-IR-R305凝胶试剂盒是不包含在E-IR-R304A和E-IR-R304B里面的，需要单独购买凝胶试剂盒；
Q6:请问BSA室温下封闭多久？
封闭操作时间通常为1.5小时。
Q7:本产品在使用前需要额外添加巯基乙醇吗？
不需要，本产品中含有DTT，作用与巯基乙醇类似，起到还原剂的作用，同时毒性也更低。
Q8:RIPA lysis buffer未开封在室温下存放了24小时能否继续使用？反复冻融的次数有限制吗？
本产品在室温下（25℃左右）放置24小时对产品效果无明显影响，可继续使用。但建议收货后立即分装并于-20℃保存，反复冻融次数不超过5次。
Q9:裂解液想问一下PMSF 跟Na3VO4的作用是？还有这个产品是什么浓度，如何使用？
这两个都是酶的抑制剂，作用是预防蛋白的降解。 PMSF常作为蛋白酶抑制剂被应用在生化和分子生物学实验中，是丝氨酸蛋白酶的抑制剂，可抑制胰蛋白酶（trypsin），糜蛋白酶（chymotrypsin）和AChE的活性。 Na3VO4是磷酸酶抑制剂，抑制ATP酶、碱性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶。 试剂盒这两个产品是100X的，使用前按照1:100的比例加入到PIPA裂解液中。
Q10:请问这个上样缓冲液适用于所有的蛋白电泳体系吗？
本产品适用于变性电泳的各种电泳缓冲液体系。
