流式配色原则第五课：子代与亲代
Source: Elabscience®Published: 2024-05-29
之前，我们逐一学习了流式配色的四大原则：强弱搭配、荧光干扰、互斥抗原、共表达抗原（点击回顾），今天我们一起来了解一下多色流式配色六大法则中的第五条——允许子代对亲代的荧光溢漏，反之不行。这条原则指的是如果需要配色的抗原之间是子代与亲代的关系，可以允许子代对亲代有荧光溢漏，同时要避免亲代对子代的溢漏。
子代与亲代是指抗原之间是上下级关系，即下级抗原是在上级抗原的基础上进行分析的。比如CD3+T细胞中，有一群细胞表达CD4，那么CD3就属于亲代，CD4属于子代。即配色时，允许CD4对CD3有荧光溢漏，但避免CD3对CD4有荧光溢漏。
多色流式实验中，因为表达CD4的细胞都表达CD3 ，所以即使CD4对CD3有荧光溢漏，也不会对CD3的检测造成影响（如图1所示）。但如果CD3对CD4有荧光溢漏，那么CD3溢漏的荧光会干扰CD4的检测（如图2所示）。
图1. CD4-FITC与CD3-PE双染结果
图2. CD3-FITC与CD4-PE双染结果
对于CD3和CD4这种分群明显的指标，这种背景信号的干扰可能影响并不太大，但如果是低表达或者连续表达的指标，由于荧光溢漏导致的背景干扰就显得比较严重了。
以Th1细胞为例，Th1细胞需要检测CD4和IFN- γ的表达情况，其中CD4是亲代，IFN- γ是子代。因为PE/Cyanine7通道对PE通道有较高的荧光溢漏，所以IFN-γ可以搭配PE/Cyanine7，CD4搭配PE。此时，IFN-γ处于没有干扰的通道，容易进行补偿调节，有利于数据的分析。
至此，流式配色的原则分享完毕。
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