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流式配色原则第五课:子代与亲代

Source: Elabscience®Published: 2024-05-29

之前,我们逐一学习了强弱搭配荧光干扰互斥抗原共表达抗原(点击回顾)这四大原则,今天我们一起来了解一下多色流式配色六大法则中的第五条——允许子代对亲代的荧光溢漏,反之不行。这条原则指的是如果需要配色的抗原之间是子代与亲代的关系,可以允许子代对亲代有荧光溢漏,同时要避免亲代对子代的溢漏。

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子代与亲代是指抗原之间是上下级关系,即下级抗原是在上级抗原的基础上进行分析的。比如CD3+T细胞中,有一群细胞表达CD4,那么CD3就属于亲代,CD4属于子代。即配色时,允许CD4对CD3有荧光溢漏,但避免CD3对CD4有荧光溢漏。

多色流式实验中,因为表达CD4的细胞都表达CD3 ,所以即使CD4对CD3有荧光溢漏,也不会对CD3的检测造成影响(如图1所示)。但如果CD3对CD4有荧光溢漏,那么CD3溢漏的荧光会干扰CD4的检测(如图2所示)。

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图1. CD4-FITC与CD3-PE双染结果

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图2. CD3-FITC与CD4-PE双染结果

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对于CD3和CD4这种分群明显的指标,这种背景信号的干扰可能影响并不太大,但如果是低表达或者连续表达的指标,由于荧光溢漏导致的背景干扰就显得比较严重了。

以Th1细胞为例,Th1细胞需要检测CD4和IFN- γ的表达情况,其中CD4是亲代,IFN- γ是子代。因为PE/Cyanine7通道对PE通道有较高的荧光溢漏,所以IFN-γ可以搭配PE/Cyanine7,CD4搭配PE。此时,IFN-γ处于没有干扰的通道,容易进行补偿调节,有利于数据的分析。


至此,流式配色的原则分享完毕。

往期回顾:

流式课堂 | 流式配色原则第一课:强弱搭配

流式课堂 | 流式配色原则第二课:荧光干扰

流式课堂 | 流式配色原则第三课:互斥抗原

流式课堂 | 流式配色原则第四课:共表达抗原


流式配色原则第四课:共表达抗原

流式配色原则总结篇

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