新品揭秘 | 三羧酸循环代谢检测那些事

三羧酸循环，简称TCA循环（tricarboxylic acid cycle），是需氧生物体内普遍存在的代谢途径。该循环是以乙酰辅酶A和草酰乙酸缩合生成柠檬酸开始，因此又称为柠檬酸循环。

三羧酸循环对于生物体具有重要意义。除了以极高的能量利用率为机体提供大量用于生命活动的能量（ATP）以外，它也是生物体内物质代谢的枢纽。一方面，除了碳水化合物以外，包括脂肪、蛋白质、核酸等在内的物质，都必须经过三羧酸循环才能彻底氧化分解；另一方面，三羧酸循环的各种中间产物，如乙酰辅酶A、α-酮戊二酸、草酰乙酸等，也是生物合成各种氨基酸、糖和脂类的原料。生物体内的各种代谢物质经过三羧酸循环联系在一起。

Elabscience^®推出了一系列三羧酸循环相关指标代谢检测试剂盒，覆盖整个三羧酸循环的大部分环节，包括关键的代谢物、酶和辅助因子。

如三羧酸循环中的三个关键的限速酶：柠檬酸合酶、异柠檬酸脱氢酶和α-酮戊二酸脱氢酶，它们分别催化了三羧酸循环中改变代谢产物碳链长度的三个重要的不可逆反应，对三羧酸循环研究具有重要意义。

TCA循环限速酶的检测原理

柠檬酸合酶活性测定

柠檬酸合酶催化了草酰乙酸与乙酰辅酶A缩合生成柠檬酸的反应。这一步反应是整个三羧酸循环的起始步骤，糖、脂代谢的中间产物乙酰辅酶A由此开始进入其分解代谢的最终阶段。试剂盒利用柠檬酸合酶(CS)催化乙酰辅酶A和草酰乙酸反应产在412 nm波长处生成特征吸收峰物质的原理、吸光度的增加来检测柠檬酸合酶活性。

异柠檬酸脱氢酶活性测定

异柠檬酸脱氢酶催化了异柠檬酸氧化脱羧生成α-酮戊二酸的反应。这是一步氧化-还原步骤，同时也是三羧酸循环中两次氧化脱羧反应的第一个反应。脱下的氢与NAD⁺生成NADH，在后续的呼吸链作用中发挥重要作用。反应生成的α-酮戊二酸不但是三羧酸循环的中间产物之一，还可以通过转氨酶作用，成为生物合成各种氨基酸的原料之一。试剂盒使用激活剂激活异柠檬酸脱氢酶，在催化反应过程中，生成的产物使450 nm波长处的吸光度发生变化，根据其变化速率可计算出异柠檬酸脱氢酶活性。

α-酮戊二酸脱氢酶活性测定

α-酮戊二酸脱氢酶催化了α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰-CoA的反应，在此过程中，进行三羧酸循环两次氧化脱羧的第二次反应，进入三羧酸循环的乙酰基的两个碳原子被彻底氧化生成CO₂。该反应是一步复杂的放能反应，需要多达6种辅助因子的协同作用，在铁死亡、铜死亡等热点研究领域中都有重要意义。试剂盒使用WST-8作为显色剂，在α-酮戊二酸脱氢酶催化底物与NAD⁺反应的同时，检测450 nm波长处的吸光度，计算酶活性。

三羧酸循环系列代谢检测试剂盒产品特点

1 高效、快捷，操作难度低，检测时间短

2 经济、方便，样本需求少，检测波长常见

3 特异性高，结果准确

4 提供真实可靠的样本验证结果和稀释比例参考

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