Cell Cycle Assay Kit (Red Fluorescence)
中文名称：细胞周期检测试剂盒(红色荧光)
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- 应用： 细胞周期
| 检测原理 | 细胞周期（cell cycle）是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。在这个过程中，细胞遗传物质复制并加倍，且在分裂结束时平均分配到两个子细胞中去。细胞周期又可以分为间期（interphase）和有丝分裂期(M phase)，细胞间期又常划分为休眠期（G0），DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成后期（G2）。DNA周期检测可用来反应细胞周期的各个期的状况，即细胞增殖状况。利用细胞内DNA能够和荧光染料（如碘化丙啶—PI）结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样可检测细胞不同周期。
细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核裂解，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞前向光散射能力显著降低，侧向光散射能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察凋亡细胞。
PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1~2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。 |
| 检测方法 | 荧光法;流式 |
| 样本类型 | 细胞 |
| 检测时间 | 3 hours |
| 检测仪器 | 流式细胞仪 |
| 荧光 | PI |
| Ex/Em | 536/617 |
| Channel set | PI,PerCP,PE |
| 自备试剂 | 无水乙醇，PBS(E-BC-R187) |
| 保存温度 | 该产品可在2~8°C/-20°C避光条件下保存12个月，具体试剂组分的保存条件请参考说明书。 |
| 有效期 | 12个月 |
| 运输条件 | 冰袋 |
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| E-CK-A301 | Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (with JC-1) | 100Assays , 50Assays , 20Assays |
| E-CK-A320 | One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit (Green, FITC) | 100Assays , 50Assays , 20Assays |
| E-CK-A362 | Enhanced Cell Counting Kit 8 (WST-8/CCK8) | 500Tests , 100Tests , 500Tests×20 |
Q1:细胞周期试剂盒里面的absolute ethanol是百分之多少的乙醇呢?也可以用70%的吗?试剂可以检测到sub-G1峰吗？
absolute ethanol是无水乙醇，不建议用70%的，因为第三步需要保证乙醇的比例。
如果有的sub-G1峰话，是可以检测到的。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及 DNA 片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组 DNA 片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞在 PI 染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于 1，在流式检测的结果图上出现所谓的 sub-G1 峰，即凋亡细胞峰。
Q2:细胞周期试剂盒能染单细胞硅藻吗？
我们没有验证过。因为单细胞硅藻有细胞壁，建议客户做预实验摸索一下染色时间和条件。
Q3:细胞周期试剂盒红绿蓝荧光该如何推荐?
如果老师的样本不含荧光，红绿蓝荧光的细胞周期试剂盒都可以使用，红色荧光试剂盒（E-CK-A351）更常用。如果样本带绿色荧光，选用细胞周期蓝色荧光试剂盒（E-CK-A353），无需调节补偿。如果样本带红色荧光，推荐选用细胞周期蓝色荧光试剂盒（E-CK-A353）和细胞周期绿色荧光试剂盒 （E-CK-A352）；如果样本带红色和绿色荧光，推荐选用细胞周期蓝色荧光试剂盒（E-CK-A353）。选择E-CK-A353前应先确认流式细胞仪是否有DAPI通道。
Q4:细胞周期试剂盒红绿蓝荧光的区别？
使用的荧光染料不一样，所以对流式细胞仪的检测通道要求和适用的样本不同。红色荧光的检测通道是PI,PerCP,PE，绿色荧光的检测通道是FITC，蓝色荧光的检测通道是DAPI。
Q5:细胞周期的实验样本能在-20℃保存多久呢?
理论上来说，固定后置于-20℃冰箱放置两到三天，对结果影响不大。
Q6:细胞周期的实验样本加入无水乙醇后置于-20冰箱1h或过夜，想请问是应该放置多久合适？
PBS重悬细胞后逐滴加入-20°C预冷的无水乙醇，边加边震荡，使细胞分散成单细胞。固定时间要求不少于1h。
Q7:如果不固定的话，周期结果会有影响吗？固定是什么作用？
固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避免组织和细胞发生降解、自溶、腐败、和变形等，使细胞和组织内的各种酶失去活性，防止细胞和组织的各种分子变性、解离，使细胞的化学物质和酶能精准定位，并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。同时，固定还可使细胞的各部分易于着色，适于观察、长期保存和分析。
Q8:做细胞周期实验的时候，是需要使用有血清培养基还是无血清培养基？
周期检测是要用到无血清培养基的。实验开始前，需要用无血清培养基培养12h，使周期同步化（注意细胞状态，无血清培养时间不能太长；细胞状态太差的话，细胞可能就不增殖了，G2期会比较少，还可能会出现亚G1凋亡峰）。然后换用正常培养基开始药物处理、干预等实验，最后收样进行细胞周期的检测。
